Faktor Leiden

Kao što je spomenuto gore, gen abnormalnosti faktora koagulacije V G 1691>A je bila otkrivena 1994. godine R. Bertina et al. A jednonukleotidni supstitucija guanin da adenina na položaju 1691 (1691 G>A) u eksonu 10 F5 gena uzrokuje molekularne nedostatak faktora koagulacije V. Zbog zamjene na poziciji 506 molekula proaktselerina arginin na glutamina (Arg506Gln) poremećeni svoju sposobnost da se ruši, što dovodi do formiranja disfunkcije antikoagulans Protein C sistema i tendenciju recidiva tromboze. Genetske abnormalnosti faktora koagulacije V (Leiden) je najčešći trombofilna defekt u evropske populacije.

Za detekciju genetskih abnormalnosti oličenje PCR. Visoka osjetljivost i specifičnost PCR pružaju in vitro sintetiziran oligonukleotida komplementarna sa odgovarajućim regiji gena ljudskog faktora koagulacije V.

Nedostatak jedinstvene nomenklature genetskih defekata izazvalo raširena u savremenoj naučnoj literaturi brojne znake ove anomalije: F5: 1691 G>A, Rs6025, Arg506Gln, G1691A, R506Q, Leiden (leydenovskaya) i drugi.

Princip metode

Za identifikaciju polimorfnih alela u F5 gena pojačanje koristeći odgovarajuće dijelove gena PCR uz naknadno određivanje pojačanja proizvoda.

Reagensa i opreme

• Kontrola uzoraka sa divljeg tipa alela i mutant tip alela.
• Kako bi se utvrdilo anomalije F5 1691 G>korišteni su je dva prajmera. Primer 1 (forward prajmer): ACGTTGGATGC TGAAAGGTTACTTCAAGGAC, Primer 2 (reverse prajmer): ACGTTGGATGCTCTGGGCTAATAGGACTAC.
• Thermo i druge opreme za obavljanje PCR.

Uzorci krvi za studije za istraživanje materijala može biti bilo koji izvor DNK, ali više venske krvi se koristi, koje uzimaju u epruvete koje sadrže EDTA. Uzorci su pohranjeni prije studija na temperaturi od 2 ... + 8 ° C do 24 sata. Long pohranjeni uzorci mogu biti samo u smrznutom stanju na -40 ... 70 ° C.

Izolacija DNK iz kliničkih uzoraka materijala može izvršiti različitim metodama, na primjer pomoću kompleta silika-based, postavlja Microcentrifuge kolone seta na osnovu ekstrakcije fenol-kloroform, i drugi.

Metode određivanja

Metoda se zasniva na više kopija biračkih DNK području pomoću in vitro enzima. Napredak u istraživanju moraju ispuniti odabrane opreme i postupak analize PCR (gel elektroforeza, blic i sl.).

Video: Nizozemska, Noord-Holland. Part1. 06-2011

Evaluacija rezultata studije

Evaluacija rezultata vrši se na način koji omogućava polimorfne oligonukleotida doma zamjena. PRIMJER vizualizaciju rezultata pojačanje je prikazan na slici. 5.1.

Video: svim gradovima i zemljama svijeta na jednom mjestu

Embodiments leydenovskoy anomalija rezultati otkrivanje faktora koagulacije V gena sljedeće: G / A - heterozigoti anomalije na poziciji 1691- A / A - homozigot anomalija. Stanovništva prevladava genotip G / G

Tumačenje rezultata ankete

Prijevoznici leydenovskoy F5 gena abnormalnosti su skloni tromboze, što značajno povećava rizik u trudnoći, korištenje oralnih kontraceptivnih, u postoperativnom periodu, i dr. Gene penetrantnost je nepotpun, stoga broj prijevoznika nema povijesti tromboze poremećaja. U ovoj izvedbi prisustvu homozigotnih učestalosti mutacija i ozbiljnosti tromboze iznad. Otkrivanje heterozigot učestalost anomalija, prema literaturi, je u populaciji oko 1-3%.

supstitucije aminokiselina na poziciji 506 daje dekolte stranice molekula faktora koagulacije V aktivirani protein C, što značajno smanjuje stopa njegove degradacije. Stoga, prisustvo gena anomalije F5 G 1691>A otpor poštovati faktora koagulacije VA aktivirani protein C.

Otkrivanje ove mutacije u bolesnika s rekurentnim trombozom omogućuje opravdati produžene antikoagulans profilaksu. Takva studija može pomoći u identifikaciji pojedinaca koji treba da odlučuju o upotrebi antikoagulansima u provedbi operacije.

Video: Dr. Elena Berezovskaya - Trombofilija i trudnoća

Uzroci grešaka

• Greške pre-analitičke faze studije (u suprotnosti vremena skladištenja ili nepravilnog transporta biomaterijala nukleinske kiseline mogu razbiti, uzrokujući lažno negativne rezultatima heparin je u stanju da inhibiraju PCR, tako da uzorci krvi ne smije se odvijati u epruvete koje sadrže heparin).
• Kontaminacije uzoraka stranog biološkog materijala.
• Kršenje načela prostornog uređenja laboratorija za molekularnu genetska istraživanja.
• Odbijanje da se prouči negativnu kontrolu.
• Odbijanje da se izvrši ponovna analiza pozitivnih uzoraka.
• Neuspjeh tehnike DNK izolacije.
• Specifičnost i osjetljivost PCR početnica ovise o strukturi, tako da je upotreba primera iz različitih proizvođača može dovesti do dobivanja različite rezultate.

Ostale analitičke tehnike

PCR varijante utvrđeno da je pouzdan procedure laboratorija, u mogućnosti pružiti visoku osjetljivost, specifičnost i obnovljivosti. U većini slučajeva trombofilna za dijagnosticiranje stanja povezana sa poremećaj proaktselerina inaktivacije može koristiti metodom koagulacije određivanja otpornosti na aktivirani protein C. Napomena, međutim, da drugih poremećaja (hiperprodukcije Antihemophilic globulin, VA i dr.) Su takođe u stanju da izazove otpor koagulacije faktor V na aktivirani protein C.