Test trombin generacija

Ovaj metodološki pristup je predložen britanski istraživači 1953. za procjenu stanja sistema hemostaze u hemofilije. Treba napomenuti, međutim, da je predloženi metod u originalu je bio vrlo daleko od savršenog, tako da za dugo vremena, ona nije data ozbiljnu pažnju. Druga metoda rođenja preživio zahvaljujući Hemker Conrad, koji je dao brojna poboljšanja u postupku analize u 90-ih godina prošlog stoljeća. Najvažniji modifikacija Hemker K. et al. je bila upotreba flyuoro- i hromogene supstrate za detekciju trombina generacije, čime je znatno povećana reproduktivnost metode. U konkretnom utjelovljenje, metodu trombina formirana tokom reakcije uništava peptida supstrata koji uzrokuje oslobađanje fluorophore molekula. promjene intenziteta emisija je otkrivena od strane fluorometer u redovnim intervalima.

Princip metode

Test se zasniva na održavanju brzine hidrolize peptida obveznica fluorogene podloge specifične za trombin. Određivanje podloge loma stopa fluorometer vrši u bunarima od 96-ploča, u kojoj je mješavina inkubirana PRP uzorak sa koagulacije aktivator. Kao aktivator korištenje rekombinantnog tkivnog faktora reagensa i kalcijev klorid i standardizirati i poboljšati stopu koagulacije u testni sistem se dodaju fosfolipidi. Proučavanje kinetike trombina generacije nam omogućava da se procijeni balans prokoagulantnog i antikoagulansa mehanizama.

Reagensa i opreme

• Rekombinantni faktor ljudskog tkiva (1 pmol).
• Specifični trombin fluorogene podloge.
• Tampon rastvor koji sadrži kalcijev klorid.
• Kalibrator sa aktivnošću ljudskog trombina 580 nmol.
• Fluorometer.

Uzorci krvi za istraživanje

Kao snimanje thromboelastogram uzorak koristiti BTP. Brojne studije na račun za doprinos trombocita u trombina generacije predlažemo pomoću plazma bogata trombocitima. Test je vrlo osjetljiva na nedostatke i ima pre-analitičke faze studije.

Video: Predavanje 29 - Ispitivanje Generation Metode

tehnika performanse

Istražni postupak se obavlja u skladu s uputama za opremu koja se koristi i algoritam kompjuterski program koji izračunava dinamiku glavnih pokazatelja trombina generacije.

Evaluacija rezultata studije

Fluorogene supstrat specifični za trombin, tako da je promjena intenziteta luminiscencije nakon toga koagulacije aktivatora proporcionalna stopa generacije ovog ključnog koagulacije enzima.

Nakon kalibracije standard količinu trombina fluorometer omogućuje izgradnju krivu trombina generacije. Istraživanje je urađeno vremena kašnjenja formiranja trombina (vrijeme LAG), maksimalni iznos trombina (Peak trombina), vrijeme je da dostigne maksimum trombin (ttPeak), kao i endogeni trombina potencijal (ETP).

Tumačenje rezultata ankete

Jer faktor koagulacije je ključni enzim za zgrušavanje hemostaze, test trombin generacija je vrijedan pokazatelj integralnog zgrušavanja krvi.

rezultati ispitivanja ovisi o načinu aktiviranja aktivatora koncentraciju koagulacije, i mnogih drugih faktora, tako da mijenjaju uvjete tehnika omogućava da se prilagodi da otkrije različite nedostatke u hemostatski sistemu. Prema tome, dodatak trombomodulin u test sistem pomaže u otkrivanju hiperkoagulabilnog smjene u pozadini leydenovskoy mutacije. Studija trombina generacije u plazme bogate trombocitima omogućava otkriti disfunkcije trombocita hemostaze Glantsmana trombasteniji, Bernard-Soulier sindrom i drugi.

Najčešće se koristi za aktivaciju koagulacije BTP tkivnog faktora koji omogućava da se ocijeniti stanje koagulacije. Ovaj učinak kod pacijenata s vremenom hemofilijom i drugim koagulopatije mjera Lag je produžen, a ETP i Peak trombin smanjena. Intenzitet tih promjena u takvih pacijenata zavisi od aktivnosti faktora koagulacije VIII i IX.

Uzroci grešaka

Greške predanalitički fazi studije, u Vol. H. pogrešno doziranje citrata na ogradu venske krvi.

• Defekti centrifugiranje dobijanja PRP uzoraka.
• Kontakt sa heparin proučavao krv iz venski kateter.
• Hemolize.

Ostale analitičke tehnike

Trenutno je razvio druge analitičke tehnike u stanju vizualizacije procesa koagulacije, kao što je način snimanja prostornog razvoja ugruška i Tromboelastografija. Sve takve tehnike vizualizacije zgrušavanje krvi i da su u stanju izračunati integral koagulacije parametara, ali je njihova dijagnostička specifičnost je i dalje niska.