Gen anomalija protrombinsko 20210 g / a

U porodicama pacijenata sa trombozom otkrivene autosomno dominantno nasljeđe F2: 20210 G / A.

U trenutno u vezi sa ovim genetskim anomalija sa hiperprodukcije protrombina. Međutim, bez obzira na tehničke sposobnosti kako bi se utvrdilo povišen nivo protrombina, otkrivanje ove bolesti treba da se zasniva isključivo na PCR podataka visoke osjetljivosti i specifičnosti PCR pružaju in vitro sintetiziran oligonukleotida komplementarna odgovarajući dio gena ljudskog protrombina.

Princip metode

Za identifikaciju polimorfnih alela u F2 gena pojačanje koristeći odgovarajuće dijelove gena PCR uz naknadno otkrivanje pojačanja proizvoda.

Reagensa i opreme

• Kako bi se utvrdilo anomalije F2: 20210 G / A se koristi sljedeće praymerypraymer 1 (forward prajmer) - 5`-TGGGAAATATGGCTTCTACA-3` (nukleotida 20035-20054) - Primer 2 (reverse prajmer) - 5`-CACTGGGAGCATTGAAGCT-3` (nukleotida 20229- 20211).
• Kontrola uzoraka sa divljeg tipa alela i mutant tip alela.
• Thermo i druge opreme za obavljanje PCR.

Uzorci krvi za studije za istraživanje materijala može biti bilo koji izvor DNK, ali više venske krvi se koristi, koje uzimaju u epruvete koje sadrže EDTA Uzorci su pohranjeni prije studija na temperaturi od 2 ... + 8 ° C do 24 sata. Uzorci su pohranjeni Long može se zamrznuti na -40 ..- 70 ° C.

Izolacija DNK iz kliničkih uzoraka materijala može izvršiti različitim metodama, na primjer pomoću kompleta silika-based, postavlja Microcentrifuge kolone seta na osnovu ekstrakcije fenol-kloroform, i drugi.

tehnika performanse

Metoda se zasniva na više kopija biračkih DNK području pomoću in vitro enzima. Napredak u istraživanju moraju ispuniti odabrane opreme i postupak analize PCR (gel elektroforeza, blic i sl.).

Evaluacija rezultata studije

Evaluacija rezultata vrši se na način koji omogućava da vizualizirati oligonukleotida polimorfnih izmjene. fragmenti DNA određeni su pomoću različitih fluorescentnih boja koji se posebno vezuju za DNK.

Tumačenje rezultata ankete

Za mnoge nosioci polimorfizma karakterističnih različite lokalizacije tromboze, rizik koji značajno povećava u prisustvu trudnoće, korištenje oralnih kontraceptivnih, u postoperativnom periodu, i drugi. Nepotpune penetrantnost gena, u tom smislu, neki operateri nemaju istoriju tromboze poremećaja. U prisustvu ovog polimorfizma varijanta homozigot dobi od prve epizode je manje, kao i učestalost i ozbiljnost tromboze iznad. Otkrivanje heterozigot učestalost anomalija, prema literaturi, je u populaciji oko 1-2%. U prisustvu F2: 20210 G / A razine protrombinskog kod pacijenata oko 1,5-2 puta veća od normalne.

Otkrivanje rekao anomalija protrombinskog gena u bolesnika s rekurentnim trombozom potkrijepiti omogućava produženo antikoagulans profilaksu. Takvo istraživanje pomaže da se identifikuju trudnica s povećanim rizikom od tromboze.

Uzroci grešaka

• Greške pre-analitičke faze studije (u suprotnosti sa uslovi skladištenja ili nepravilnog transporta biomaterijala nukleinske kiseline mogu razbiti, uzrokujući lažno negativne rezultatima heparin može inhibirati PCR reakcije, tako da uzorci krvi ne mora se odvijati u epruvetama sadrži antikoagulans).
• Kontaminacije uzoraka stranog biološkog materijala.
• Kršenje načela prostornog uređenja laboratorija za molekularnu genetska istraživanja.
• Odbijanje da se prouči negativnu kontrolu.
• Odbijanje da se izvrši ponovna analiza pozitivnih uzoraka.
• Neuspjeh tehnike DNK izolacije.
• Specifičnost i osjetljivost PCR početnica značajno ovise o strukturi, tako da je upotreba primera iz različitih proizvođača može uzrokovati različite rezultate.

Drugi analitički PCR tehnologija Razne oličenje se smatrati pouzdanim laboratorijskih postupaka u mogućnosti pružiti visoku osjetljivost, specifičnost i obnovljivosti. Uprkos postojanju tehničke mogućnosti da identifikuje povišen nivo protrombina, dijagnoza trombofilije treba da se zasniva isključivo na korištenje PCR varijanti.