Geni sintezu antitijela. Broj gena uključenih u sintezu imunoglobulina

primarno istraživanje struktura i genetika imunoglobulina To je dovelo do zaključka da je svaki nolipeptidnaya lanac kodiran barem dva gena: V-gen odgovoran za varijablu regionu i C-gepami odgovoran za konstantnim regijama molekula. Broj oba gena u genomu ćelija je od fundamentalnog interesa. Činjenica da u posmatranom raznolikost antitijela različitih autora objasniti ili u smislu "klica" teorija gena, prema kojem u genomu seta gena za sve poznate V-domena, tj. E. Mnoge tisuće V-gena, bilo sa stanovišta somatskog teorije mutacije pri čemu je ograničen set V-gena u genomu, i raznih struktura imunoglobulina (antitijela) nastaje kao posljedica somatske mutacije. Tu je i kompromis gledišta. Sve ove ideje iscrpno razgovarali da postane lider i koautora (Leder e. A., 1974), tako da što više detalja nećemo ih zaustaviti.

Imajte na umu da je napravljen AE Gurvitch i R. S. Nezlin (1965) original pretpostavka da pojedinim poglavljima genoma kodiraju antitijela i aktivni centri i da L-II- i dits "okupljaju" manjih, nezavisno sintetiziran lanaca. Izuzetno je zanimljivo da nakon pet godina, ove ideje ponovo pojavila u obliku hipoteze o "realizacije» ( «umetanje») informacije kodiran polynucleotides male (oko 30-45 nukleotida), osiguravajući dostupnost CDR u H i L-lanaca (Wu, Kabat, 1970).

konačna odgovor na ova pitanja, Očito, to može pružiti samo direktno određivanje V- i C-gena u genomu. Izolacija mRNA preparata s visokim stupnjem čistoće i odgovarajući dozvoljen start eksperimente. Pristup razvijen od nekoliko godina, je da se utvrdi broj gena RNA-DNA hibridizacije. S obzirom da je struktura mRNA transkribovao strukture potpuno komplementarna DNA dio, onda ova metoda može odrediti broj gena i kako bi se utvrdilo da li su njihove pojačanje javlja (množenja) za indukciju sinteze imunoglobulina.

Trenutno, istraživanje ove vrste se obavljaju mRNK, kodiraju sintezu L-lanaca kao dovoljno čist pripreme N-mRNA se još nije dobio. Bitan uslov za obavljanje ovih eksperimenata je, prvo, čistoća preparata mRNA i visoke specifične aktivnosti i, drugo, prisustvo veoma veliki višak DNK. Dobiti vysokomechenye mRNA droga je teško. Obično se to radi pomoću mRNA izolovana NT ćelije gaje u prisustvu visokih doza ili 32P-3H- predshsstvennikov ili više - mRNA označen sa 125I in vitro (Farace ea, 1976- Matthyssens e A, 1976 ....). Tu je i indirektan verziju metode. Sastoji se u tome u početku reverzne transkriptaze na mRNA pripremljen matrici vysokomechenuyu komplementarne DNA (cDNA), a već se koristi za hibridizacije na ćelijski DNK (Šehter e. A., 1976- Storb e. A., 1976).

Prečišćeni mRNA ili cDNA hibridizovana sa denaturisani određenim uslovima (sonication) ili DNK iz jetre miša mijelom NS ćelije i postotak vezanog RNK (ili cDNA) kao funkciju vremena hibridizacije. (Određivanje se temelji na stabilnost hibrida RNase efekt.) U takvim uvjetima, postotak hibridizovanim RNK (cDNA) (f) zavisi od koncentracije RNA (cDNA) (Ro), koncentracija DNA (C) i vremena inkubacije (f). Uz vrlo veliki višak DNK ne zavisi od f R0, a ovisi samo o C "i t (Cot). Količinu Cot, na kojem hibridizacije je 50%, očito ovisi o stupnju komplementarnosti DNK i mRNA (cDNA).

stupanj homologije dva mRNA (A time i njihova V- ili S-gen) određuje se na konkurentnom inhibicije eksperimenata hibridizacije označenih pripreme mRNA neoznačeno droge homologni i heterologne mRNA, ili izdvajanjem DNK iz formirana hibrid, a hibridizacije s drugim oznakom homologni i heterologne mRNA. Usporedbom ovih rezultata sa podacima na primarnoj strukturi tih polipeptida koje su kodiran mRNK ispitan, može se vidjeti da li je kriva definisan učestalost ponavljanja hibridizacije gena s procijenjenim iz podataka o homologije V- i C-domena.