Hibridizacija mRNA i DNK antitela. Lokalizacija V- i gena u genomu imunoglobulina

U eksperimentima na hibridizacije različite mRNA i DNK, pogotovo u početku obično dobiti dvofazni kriva sa zonom tranzicije u jednoj regiji, a drugi nizak - u visokim vrijednostima Cot4l.

Koristi se za ugnjetavanje hibridizacije neoznačenih mRNA, kodiranje L-lanac homologne ili heterologne C-regije već dozvoljeno da se utvrdi da visoke vrijednosti zbog hibridizacije Cotih C gen i da je broj tih gena ne prelazi 2-4 po haploid genom. Prisustvo na terenu sa niskim vrijednostima coth istraživači dijela smatra kao dokaz značajnog broja "Germinal» V-gena. Međutim, povećanje čistoće mRNA pripreme i korištenja mRNA fragmenata, koji sadrži i polya slijed je otkrio da je V-geni su jedinstveni, i da su predstavljene u genomu u iznosu koji ne prelazi dva ili tri primjerka u posljednjih nekoliko godina.

Razmotrimo primjer podataka hibridizacije eksperimente na mRNA, kodiraju sintezu lambda-L-lanac mišjeg mijeloma MOPC 104E sa DNK iz myshn jetre (Matthyssens e. a., 1976). Na osnovu podataka o primarnoj strukturi V-regija trenutno istražuju lanac miševa lambda (18 uzoraka) podijeljena u sedam podgrupa. Ako za svaku V-regija postoji posebna V-gen, ona mora biti otkriven 7 V-gena u genomu miša. U stvari, njihov broj ne može biti manji od 145 (pod tim uvjetima, vjerojatnost otkrivanja sedam različitih podgrupa u studiji je ukupno 18 uzoraka je povećan na 90% - 50% vjerovatnoće broj V-gena mora biti najmanje 25). hibridizacije je određena iz krive da je V-gen za L-lanac MOPC 104E se ponavlja u genomu ne više od 2-3 puta. U isto vrijeme, stupanj homologije dva mRNK kodiraju sintezu dva lambda lanaca, čak pripadaju dvije različite podgrupe (MOPC 104E i Nors 2020), vrlo velika. Ekstrapolacije ovih podataka na ostatak mRNA koji kodira lanac lambda, može se zaključiti da je ovom sličnost između V-domena ovih lanaca L-mRNA MOPC 104E bi se gnbridizovatsya sa svima njima i, prema tome, vrijednosti Dječji krevetić bi morao biti znatno niži nego definirano u eksperiment (više ponavljanja, to je manja vrijednost Dječji ,,,). Ovi podaci ukazuju, dakle, protiv prisustva u genomu veliki broj V-gena i stoga u korist somatskih mutacija kao primarni faktor, pružajući razne antitijela (imunoglobulini).

Trebalo bi, međutim, imati na umu da metoda hibridizacije To je prilično komplicirana i, po svemu sudeći, ne dozvoljava da se jasno interpretirati rezultate. Tako je, za razliku od eksperimenata gore opisane, koristeći cDNA u V- i C-domena u posebno (cDNA i kDPKs) je pronađen hibridizacije kDNKu visoku specifičnost za mRNA (Smith, 1977- Stavnezer, Bishop, 1977). Utvrđeno je da, dok kDNKs jednako hibridizuje sa svim mRNA koji kodira L-lanac tipa kapa kDNKu reaguje samo kapa homologna mRNA. Ovo pokazuje da je broj V-gena određuje hibridizacije može se potcenjivati.

U isto vrijeme, način hibridizacija Pokazalo se da je vrlo korisna za proučavanje lokalizaciji V- i C-gena u ćelijskom genoma. Nedavno, ova metoda je bio u stanju da pokaže somatske reorganizacije gena koji kodira V- i C-regija jednog imunoglobulina. Pokazalo se da je u embrionalnom miša genoma V- i C-gsny odvojeni, dok je u tumor (plazma-nit MOPC 321, Nors 2020), oni se nalaze u blizini (spojene).

krive mRNA hybridizing DNK, izveden iz ćelije jetre i mijeloma, bili su gotovo identični. To znači da u ćelijama proizvodnju imunoglobulina, nema pojačanja gena koji kodiraju njih.

Dakle, u ovom trenutku nađen, genoma koji ima 2 ili 3 gena koji kodira V-regije lambda lanaca, 2 ili 3 gena koji kodira V-regija lanca kapa, kao i 2-4 gena koji kodira C regiji L-lanaca.

prvo, ne postoji Spoj V- i C-gena, onda je ovaj komad DNK plus 200-450 neprevedenih nukleotida prepisuju u mRNA da nakon ulaska do kraja 200 3`-polya nukleotida prevezeni u citoplazmu i uključen je u polyribosomes, koji kodira sintezu prekursora polipeptidnih lanaca imunoglobulina.

Nakon cijepanja prethodnica ekstrapeptidov (A možda i prije) počinje sastavljati imunoglobulina molekula, prebaciti ih u mikrozomalnim vezikule i bilo lučenje ili ugradnju u stanične membrane.