Metode za izolaciju polyribosomes. Dimenzije polyribosomes sintezu antitijela

Trenutno, da se istakne polyribosomes od tumora limfnog tkiva i mijeloma obično koriste svoje homogenizacije u Tris pufer rješenja (pH 7,0-7,6) koji sadrži saharozu, KCl (ili manje - NaCl), MgCl2 (ili magnezij acetata) i bilo koji od RNase inhibitora (češće - heparin). Preduslov je upotreba reagensa koja ne sadrži RNase. Prvo ukloniti iz homogenata jezgra i mitohondrije postmitochondrial supernatant je dodan u bilo koju od deterdženta (natrijum deoxycholate ili Triton X-100) je raspušten enodoplazmaticheskogo retikulum membrana i ubrzao polirobosomy (ili frakcionisana) u koraku (0,5-1,5 M) ili linearne (obično 15-30% rastvor) saharoze gradijenti. Prinos poliribosomnogo materijal je u ovom slučaju 30-50% svih ćelijski ribozome.

Stupanj Nativity polyribosomes, dobiti iz različitih izvora utiču na saharoza koncentraciju, ionska jakost i pH odnos pufera K / Mg se koristi i prirode deterdžent. Tako je, za polyribosomes od slezine poželjno koristiti Triton X-100, kao što je u prisustvu natrijevog deoxycholate ističu se degradacija. U nekim slučajevima se preporučuje dodatak malih količina SaS12 ili spermidin jačanje stabilnosti ćelije jezgara (Goryunova et al., 1974 Wall e. A., 1977), i 2-merkaptoetanol (Schechter, 1973). U cilju smanjenja vremena kontakt polyribosomes iz ćelije lizat se može direktno primijeniti na ćelije koje sadrže deterdžent inhibitora laminat direktno na saharozu gradijenta. U ovom slučaju, tijekom centrifugiranja kletkp istovremeno lysed i frakcionisani (Davis e. A., 1969).

Treba napomenuti da je izolacija autohtonih polyribosomes ćelije iz limfnog tkiva normalnih ili imuni životinjskog tkiva je mnogo složenija i manje razvijenim postupak od njihovo izdvajanje iz plazmocitomu. Možda je to zbog činjenice da postoji plazmocitom endogenih RNase inhibitor, dok je u slezeni i limfnim čvorovima, to nije, i RNase aktivnost u imunizacije čak i povećava.

znatan uloga, očigledno ima neku vrstu životinje. Najpovoljniji objektima, red podaci su slezene i limfnih čvorova pacova, od kojih je moguće dobiti native polyribosomes, sedimenting na 250-350S i 160-190S se sastoji od aktivnog puls i aminokiselina oznaku (Vassalli, 1967- Vasil et al., 1969). Tu su i izvještaji o raspodjeli native polyribosomes iz slezine kunića (Becker, Rich, 1966- Scharff, Uhr, 1965) i zamorčića (Nikolaeva, 1976). Jer tumor tkiva najbogatiji izvor polyribosomes su mielomy- limfoma u manji broj ovih organela (Sherr, Uhr, 1971a).

Kao rezultat toga, poboljšanja frakcioniranje tehnika limfnog tkiva životinja ćelije i Murine plazmocitomu uspjeli izolirati raznim polyribosomes sa sedimentacije konstanti iz 118S do 350S. Dokazano je da imunizacija iznos polyribosomes i pol do dva puta povećava (Moav, Harris, 1970- Yurin, 1971), kao i njihove specifične distribucije postaje dvofazni prirode. Slični podaci o mijeloma dobiveni su Schubert (Schubert, 1968) i kontakt (Sidorov et al., 1973).

Pretpostavlja se da je dvofazni distribucije polyribosomes, označeni rastući polipeptidni lanci odražavaju prisustvo dve klase polyribosomes uključeni u sintezu H- i L-lanaca. Imuniprecipitaciona eksperimenti sa polyribosomes antiseruma na H- i L-lanaca je zaista pokazao da je H-lanac otkrivene samo na polyribosomes 270-300S, a L-lanac - po mogućnosti na polyribosomes 180-190S (Shapiro ea, 1966a- Askonas, Williamson, 1967b ). Prema kalkulacijama obavlja autora, kao polyribosomes treba da sadrži mRNA, koja se sastoji od oko 1250 i 500 nukleotida, tj. E. Vrlo pogodan za kodiranje sintezu H- i L-lanaca.

dobijenih podataka dva fundamentalno važnih zaključaka, i to: 1) sintezu imunoglobulina je monotsistronnyi prirode i 2) veličine polyribosomes i mRNA koji su uključeni u formiranju H- i L-lanaca, dovoljni su da kodira sintezu svakog od njih u cjelini.