MRNA je uključen u sintezu antitijela. Metode proučavanja mRNA

trenutno, dva pristupa - kemijske i imunohemijska. Prvi se temelji kemijske frakcioniranje mRNA izolovana iz ćelija proizvodnju imunoglobulina. Glavni koraci su: izbor mislomnyh ćelije ili mikrozomalnim membranu vezan polyribosomes (Stavnezer ea, 1971- Milstein i e 1972 ....) - vađenje RNK od njih pod uvjetima koje ih sprečavaju degradatsiyu- gradijent RNK frakcioniranje gustoća saharozy- izbor frakcije odgovara veličini namijenjen mRNA pročišćavanje kolona ribozomalna RNK oligo ((1T) - ili poli (u) -cellulose (ili sepharose), samo bogati kašnjenje adennlovymi baze mRNA (Polya mRPK), i proučavanje bioloških aktivnost Dedicated IP akcija.

U nekim slučajevima, dodatno pročišćavanje mRNA pripreme rabljene polnakrplamidnom elektroforeze gel u prisustvu 99% formamid (Farace e. a., 1976- Matthyssens e. a., 1976). Sa ovim ili drugim varijacijama gore šeme trenutno u upotrebi od strane ogromna većina istraživača. Prinos pojedinačnih Polya mRNA obično je 0,01% od iznosa RNK uveo (Brownlee e. A., 1973). Kao rezultat toga, trenutno izdvaja plazmocitomu nz MOPC 70E, MOPC 21, MOPC 41 nekoliko mRNA kodiranje i H i L-lanca. Čistoće većine tih lijekova ne prelazi 40-60%.

Samo jedna grupa autori nedavno uspjeli na takav način da se dobije mRNA za više od 90% čistoće (Matthyssens e. a., 1976). To i ne čudi. Metoda koja se koristi se temelji, kao prvo, na odvajanje RNA molekula u skladu sa njihovim molekularne težine i, drugo, na Katedri za stanovništvo razvodnjena sadrže RNK lišen od njega.

Naravno, ćelije mogu predstavljaju broj mRNA sa sličnim svojstva koja se ne odnose na imunoglobulina. Svi ovi će neminovno kontaminirati RNK pripreme pojedinačnih imunoglobulina RNK. Očigledno, to bi bilo veći ili manji ili, u zavisnosti od relativne proporcije imunoglobulina sintetiziraju ćelije ovih nečistoća.

Stoga, za mRNA izolacija od myelomas, sinteza imunoglobulina u kojoj 30-40% sinteze svih proteina u cjelini, ova metoda može biti ispolzovan- u isto vrijeme da izoluje mRNA koje kodiraju sintezu imunoglobulina od normalnog limfnog tkiva, posebno sastava vrlo heterogen ćeliji slezene jasno je da je neodgovarajući.

mnogo više perspektiva, Iz našeg gledišta, to je imunohemijska pristup rješavanju ovog problema. Njegova prednost leži u činjenici da je već prvi korak frakcioniranje uključuje strogo specifičan izbor pojedinca polyribosomes pomoću antitijela na protein sintetiziran ovim polyribosomes. Postoje tri varijante ove metode. Porijekla - taloženja polyribosomes antitijela na protein sintetiziran u prisustvu nosača, odnosno isti protein (coprecipitation) .... (Delovitch i e, 1972- Laskov, Mitelman, 1975.)

Drugi - obrada polyribosomes antitijela na protein sintetiziraju ih i taloženjem nastale kompleks antiserum na antitijela (indirektni padavine) (Schechtcr, 1973, 1974a). I treći - vađenje pojedinačnih polyribosomes preko immunosorbents sadrže kovalentno ili ne-kovalentno povezani antitijela sintetiziran na polyribosomes proteina (Sidorov et al, 1973- Sidorova sa, 1974 Lubimova et al, 1975 ....). Iz tako dobijene pojedinačne polyribosomes ili drugi način polysomal RNK je izvađen i RNK ukloniti donošenjem mješavina kroz stupac s oligo ili poli (U) -cellulose. Koristeći imunohemijska pristup uspio dobiti mRNA pripremama oko 95% čistoće.