Prevođenje mRNA. Karakteristike mRNA prevođenja pod sintezi antitijela

biološka aktivnost mRNA izolovana pripreme ocenjuje za njihovu sposobnost da se sintetiziran u ćeliji u vezi polipeptidnih lanaca. Definiranje sintetički peptid određenu vrijednost u odnosu na sve novosintetisanih, takođe može odrediti čistoće pripreme mRNA. Preduvjet je u ovom slučaju je upotreba proteina označavanje nije bilo jedne amino kiseline, ali smjese od najmanje 10 aminokiselina i radioaktivnih kemikalija metode analize visoke rezolucije (npr dvodimenzionalni peptid mapiranje).

Za prijevod mRNA sistemi Cell-free koriste tri vrste Krebs ascitesa hepatoma (Swan ea, 1972- Schechter, 1973 ..). zec retikulocita (Stavnezer, Huang, 1971- Mach e. ​​a., 1973- Cowan e. a., 1976) i pšenica sadnica (Schechter, Burstein, 1976- Storb, Marvin, 1976). Najpogodniji, po svemu sudeći, je posljednji sistema. Prinos oznakom prekursor u njemu je 0,1 pmol ili 2,6 ng u 0,007 jedinica uvedena A2vo mRNA (Schechter, Burstein, 1976).

Jer u ovoj fazi izazov opisao istraživanja je proučiti potencijalne translaciona sposobnost mRNA, i sistem ćelija bez biljnih i životinjskih u principu ponašati u tom pogledu isti (Schechter, Burstein, 1976), stepen podobnosti i prednosti sistema očigledno ovisi o sljedeća tri parametra: veličina endogenih proteina sinteza (što je niža bolje), dostupnost i jednostavnost potrebne sastojke i količine mRNA koja mora biti u sistemu za dobijanje pouzdanih istražuju fuziju proteina.

Video: Broadcast proces za plastiku razmjenu

analogni sistem ćelija bez ponekad služe kao žaba jajnih ćelija. Dokazano je (Smith e. A., 1973) da je uvođenje u oocita u mRNA kodiranja imunoglobulina lanaca., Dovodi do sinteze tih lanaca. Ova metoda je, međutim, složeniji i zahtijeva značajne količine mRNA.

Video: Predavanje 3. Prepiska, Prevođenje

većina eksperimenata nosi program sa mRNA koje kodiraju sintezu L-lanca (L-mRNA), jer njihovo izdvajanje je mnogo lakše nego izolacija mRNA kodiranja za sintezu H-lanaca (H-mRNA). Učenje prevođenje proizvode mRNA koji kodira L-lanac mijelom imunoglobulina dovela je do neočekivanog rezultata. Utvrđeno je da mRNA u sistemima ćeliji bez kodiraju sintezu polipeptida (prekursor) većih dimenzija nego zrele L-lanca. Formiranje prvih teških proizvoda pod djelovanjem 13S mRNA plazmocitomu MOPC 41 ćelije opisao Swann i drugi (Swan e A, 1972.)., Pod djelovanjem 10-14S mRNA iz ćelija plazmocitomu MOPC 21 -. Milstein et al (Milstein i F,. 1972). Molekularne težine dobijeni proizvod bio veći od molekularne težine u odnosu na L-lanaca (1500), od kojih je zaključeno da sadrži dodatnih 15 aminokiselinskih ostataka.

kao kada se dodaju u ćeliju sistema besplatne 355-formil-tRNA kao jedini izvor tags 355-metionil otkrivene u teškoj komponentu, zaključeno je da je barem dio tih dodatnih aminokiselina nalazi na NH2-koitse molekule L-lanca (u eukariota sintezi polipeptidna lanca počinje uključivanje metionin) . Kasnije podaci prekursor sinteze potvrđeni su u eksperimentima s mRNA "sinteza kodiranje XL-lanaca MOPC 70E (Toncgawa, Baldi, 1973), MPC" (Storb, Marvin, 1976), MOPC 41 (Mach ea, 1973), MOPC 321 ( Schechter, Burstein, 1976), MOPC 63 (Šehter e. a., 1976) i L-lanaca MOPC 104E (Burstein e. a., 1976).