Indirektni dijagnozu genetskih bolesti. Preciznost molekularne dijagnostike mogućih izvora pogreške.

Indirektni (indirektni) pristup molekularnu dijagnostiku istorijski je ranije i univerzalna. Ona se zasniva na analizi intra- i vnegennyh polimorfne lokacijama. Kao što je potonji normalno vire kratak DNK sekvenca iste homolognih kromosoma regijama koje se razlikuju u primarnoj strukturi. Ovi dijagnostički polimorfne stranicama se može nalaziti bilo u okviru samog gena ili u neposrednoj blizini.

Neophodan uslov za indirektno DNK dijagnostike To je prisutnost u porodici bolesnog djeteta ili priliku da prouči njegov DNK (krv mrlje, histološki preparati, itd). Uspostavljanje informacija o sadržaju uključuje identifikaciju polimorfne stranice, koji se može koristiti kao molekularni marker za diskriminaciju i mutanta i normalnog alela. U slučaju autosomno recesivnih bolesti roditelji će biti heterozigot za ovaj polimorfizam, a pacijent - homozigoti jednog alela markera. To heterozigotnosti za molekularnu polimorfizama definira sadržaj informacije o određenoj porodici visokog rizika rođenja djeteta sa genetska bolest. Ovisno o distribuciji marker alela na homologna hromozoma pacijenta i njegovi roditelji porodice mogu biti potpuno informativne DNK dijagnostike djelomično informativne ili neinformativan.

Od presudne je važnosti da se analiziraju porodice visokog rizika je broj polimorfnih stranicama jednog gena, kako bi se utvrdilo točno da nikakve posebne alel naslijedila mutirani gen, i da porodica potpuno informativno za buduće PD.

tačka Prednost indirektne metode - mogućnost DNK dijagnostike bez tačnu identifikaciju mutacija gena, čak iu nedostatku preciznih podataka o identifikaciji i kloniranje mutirani gen. Njegova značajna mana je nemogućnost da se dijagnoze u odsustvu bolesnog djeteta (ne može precizno odrediti koji polimorfnih alela povezanih mutirani gen), greške u dijagnozi zbog mogućnosti prelaska preko tokom mejoze i nosi polimorfne sajt na zdrav alela.

Preciznost za molekularnu dijagnostiku, moguće izvore pogreške

U obavljanju prenatalna dijagnostika molekularnim metodama važno je imati na umu dva glavna izvora pogreške:
- kontaminacije uzorka ćelije fetusa majki;
- mogućnost prelaska kada se koristi indirektne metode.

S obzirom na vrlo visok osjetljivost PCR metodom, važno je da bi se izbjegla kontaminacija uzoraka fetalnog tkiva majke ćelije. Čistoće uzorka za analizu može BP postići samo pažljivim odabirom posteljice horionskih resica ili pod dvogled povećalom, zatim pranje sa rastvora. To je posebno važno za sprečavanje majke kontakt krvi u slučaju fetusa uzorkovanja krvi pupčane vrpce po kordocenteza. Visoka kvalifikacija lekara-operater i korištenje kvalitativnih reakcija identificirati krvi majke nečistoća izbjegli ove komplikacije. Rizik takvih dijagnostičkih grešaka može značajno bp umenshen prilikom rada u sterilnim uvjetima.

Pouzdanost za molekularnu dijagnostiku po direktnom metodom, i.e. identifikovanjem mutacije gena je vrlo visoka i približava apsolutna. Međutim, s obzirom na čitav niz mogućih promjena u genomu tokom sazrijevanje gameta (Crossing-over), te u ranoj fazi embriogeneze (mutageni učinak) je preciznija dijagnostička indeksa od oko 99,9%. Znatno teže procijeniti rezultate molekularne dijagnostike indirektne metode. U slučaju registracije intragenskim polimorfizama preciznost indirektne dijagnoza je prilično visoka, s obzirom na količinu vnutritennogo crossover obično ne više od 0,1% za većinu poznatih gena.

Izuzetak mogu biti samo relativno velika gena, kao što su distrofina gen, hemofilija A, neurofibromatoza, i drugi. Dakle, u slučaju distrofina stopa pogrešna dijagnoza može biti do 2%, što odgovara visoke frekvencije crossover vnutritennogo (oko 2%) u ovom Giant gena (2,2 miliona bp). Također je važno uzeti u obzir stepen rođaka i probands pacijenta koji provodi AP. Količina moguća povećanja greške ako je marker alel ne određuje u bratsko voća, dok je drugi rođaci. Posebno treba pažljivo proceniti rezultate indirektne dijagnoza pomoću vnegennyh polimorfnih lokusa. Smatra se da sa sigurnošću da provedu AP u ovim slučajevima može biti samo istovremeno testiranje nekoliko polimorfnih lokaliteta bočni mutirani gen. Obično se koristi za molekularnu dijagnostiku markeri, učestalost rekombinacije koji mutiranih alela iznosi manje od desetina ili stotinki posto. DNA polimorfizama karakteristika sekvence početnica za PCR, indirektne metode vrijednosti pogreške za razne bolesti dijagnosticiran prenatalno su sažeti u komentari i monografija.