Dijagnoza steroidnih hormona. metode

Video: Savremene metode dijagnostike i liječenja bolesti jetre

Precizno mjerenje malih koncentracije steroidnih hormona i njihovih metabolita metodu imunološkog ispitivanja pomoću konkurentne inhibicije Imuniprecipitaciona, ili radioimunoeseja (RIA), koji je prvi opisao Berson i Yalow 1960 .. Međutim, dalji razvoj ove tehnike naučnici su suočeni s određenim poteškoćama. Prvo, steroidi, ne-imunogeni, i imaju sličnu strukturu - ciklopentan-Hapten nukleus sa malim varijacijama, što otežava proizvodnju specifičnih antitijela.

steroidi To mogu biti imunogeni, da im se pridruže Hapten proteina nosača, i nivo antitela mogu povećati prije imunizacije haptens. Međutim steroida dio, za koji je konjugirana protein ima značajan utjecaj na specifičnost antitijela proizvedenih. Prema tome, antitijela stvara tokom konjugacija goveđi serum albumin na poziciji 19 izložba višu specifičnost u odnosu sa odredbama 3 ili 17. Za preciznije tumačenje kliničke potrebno imati podatke o cross-reaktivnost svakog antitijela odabrana za ovu analizu.
većina firmama - proizvođači reagensi daju podatke o svojim cross-reaktivnost antitijela, ali oni nisu uvijek pouzdani i trebalo bi da bude upoređene da je laboratorija, koji će izvršiti analizu.

Drugo, visokog afiniteta vezivanja proteini, naći u serumu, kao što su SHBG, takmičiti sa antitijela i na taj način stvaraju buku za određivanje broja molekula steroida RIA. To dovodi do poteškoća za direktno mjerenje i zahtijeva prethodno vađenje steroida s organskim otapalima i često hromatografskih razdvajanje. U isto vrijeme, neke kemikalije, kao što su 8-anilinonaftalensulfonat, su u stanju da inhibiraju steroida vezivanja proteina, koji omogućava mjerenje koncentracije steroida direktno bez prethodne ekstrakcije.

Video: Moderna bezopasne metode dijagnostike stopala i kičme ortopedicheskoym centar "Julianna"

direktan analiza Potrebno je malo vremena i može se automatizovan. U komercijalno dostupni Automated jedinice za određivanje koncentracije estradiola, progesterona i testosterona, koji se koriste u mnogim laboratorijima. Takvi testovi, međutim, karakteriše niska osjetljivost, kao i za određivanje minimalne koncentracije - niska pouzdanost. U tom smislu, oni se ne preporučuju za upotrebu u određivanju izuzetno mali koncentracije hormona, kao što su estradiol kod djece i muškaraca (<100 пг/мл), тестостерона у детей и женщин (<1,5 нг/мл) [64] и прогестерона во время стимуляции яичников (<1 нг/ мл).

problem može riješiti vađenje seruma heksan (omjer volumena 3: 2), a zatim po svojoj sušenja i smanjenje u serumu bessteroidnoy, koji se potom podvrgavaju analizi na automatskoj jedinici.

aplikacija plinske kromatografije u kombinaciji s masenom spektrometrijom (GC / MS) prevazilazi mnoge od nedostataka imunološkog ispitivanja i smatra se više pouzdan i precizan način. Međutim, GC / MS se odvija u nekoliko koraka, uključujući i ekstrakcija otapalom, hromatografska razdvajanja, i kemijske tumačenje koje prethode instrumentalne analize, kao i osjetljivost GC / MS je često niža nego kod nekih vrsta imunoanaliza. Nedavno, ova tehnika je raseljeno tečne hromatografije u kombinaciji s masenom spektrometrijom (LC / TMS), koje imaju više osjetljivost i performanse u odnosu na GC / MS.

Sada, ovaj novi tehnologija smatra benchmark. LC / TMS je korišten za istovremeno mjerenje estradiola i estron nivoa u ljudskoj plazmi bez unaksno. Ove tehnike se može preporučiti kao referenca i koristi za standardizaciju i odobravanje imunološkog ispitivanja studije koje pružaju potrebne kliničke potrebe za jednostavnošću i visoke propusnosti.