Imunoglobulin reaktivnost. Metoda spin-oznakom haptens

Hsia i Little (Hsia, Little, 1973) su istraživali interakcije dva spin-označen haptens - DNP Hydrazone derivat N-1-oxyl-2,2,5,5-tetrametil-3-pirolidinon (I) i M-1- (oxyl-2,2,5,5-tetrametil-3-metilamino) 2 4-dinitrobenzenom (II) sa dva mislomnymi IgA - MOPC 315 i 460 kao EPR metoda, kao i da se smanji kvantni prinos fluorescencije proteina.

Otkrili da vezivanje haptens I i II proteina MOPC 315 N-O-grupa, u oba slučaja se snažno imobilišu stanju, ali dvije vrste imobilisane komponente su uočene u ESR spektru spoj II u odnosu na niz spojeva I. Kada vezivanje proteina MOPC 460 slobodu rotacije N-O grupa spoj sam i znatno ograničena, dok je na rotacije-N-O grupa spoj II vezivanje za ovaj protein ima malo efekta.

Međutim, sudeći po blizu pada u kvantnoj prinosa fluorescencije nakon vezivanja proteina spin-oznakom haptens i termodinamike studije ovog procesa, afinitet jedinjenja I i II proteina MOPC 315 i 460 se malo razlikuje. Shodno tome, stupanj imobilizacije N-O grupa spin-označeni Hapten nisu u svim slučajevima karakterizira snagu kompleksa.

Prema autorima, razlike u imobilizacije spojevi I i II mogu biti uzrokovana dva razloga: 1) ligandi vežu za različite lokacije conformationally krute aktivne stranice, 2) konformacija aktivnog može doći do stabilizacije u različitoj mjeri ovisno o razlikama u strukturi ligandi.

u drugim Istražili smo uzroke, uzrokujući pojavu dva tipa imobilisani komponente u ESR spektar kompleksa II proteina MOPC 315. Pokazalo se da je to zbog dva oblika enantomernymi spin-oznakom Hapten II. N-O grupa formira ligand sa zastavom manje hidrofobne mikrosredinu, a drugi - više hidrofobne, što je rezultiralo u drugačijem položaju od nepokretnom komponente na osi jačine magnetnog polja. Binding odvojeni oblici enantomernyh (spin-označen amina - nije igrao) proteina MOPC 315 (što dovodi do pojave samo jednu vrstu komponente.

Metoda spin-oznakom haptens

Zamjena spin-oznakom haptens u aktivnom lokacijama antitijela homolognih Hapten E su korišteni Leutom i članova (Leute e. a., 1972) za određivanje koncentracije morfija u testu rješenje. Ova metoda koristi efekat snažan rast od visine EPR linija spektra spin oznakom morfin u tranziciji iz imobilizovan države na slobodno kao rezultat raseljavanja aktivnog centra. Visina uskih linija dezinhibisani EPR karakterističan spektar u ovom slučaju koncentracije morfija u testu rješenje.

Donju granicu osjetljivosti takav način-10 7M morfin (0,03 mg / ml). Osim toga, ovaj pristup je razvijen (Montgomery e. A., 1975) te je korišten za određivanje koncentracije broj lijekova u serumu. Pokazalo se do 100 (puta osjetljiviji od konvencionalnih metoda kemijske i posjedovao visoku specifičnost. Za jedno određivanje prilično 50 .mu.l serumu.

Hsia i kolege koriste kompleks DNF - metilen (N-1-oxyl-2,2,5,5, tetrametil-3-metil-aminopyrrolidine-2,4-dinitrobenzenom) sa mijelomom IgA (MOPC 315) kao model sistema za proučavanje cross-reaktivnost proteina u odnosu na DFT i njegovi analozi. Na količinu slobodne, aktivni centri raseljeni iz spin-oznakom Hapten je suditi prema intenzitetu komponenti EPR spektra vysokopolyyuy. Kvantitativne procjene dobiveni ovom metodom su u dobrom dogovoru sa rezultatima ravnoteže dijalizu. Predložena metoda je vrlo obećavajući u imunohemijski studija.
sljedeće zaključke o strukturi aktivnog antitijela može izvršiti na osnovu podataka dobijenih.