VWF antigen: određivanje metoda

Na površini od plastike bunara ploče sorbed antitijela na von Willebrandov faktor. U prvoj fazi istraživanja u dobro u mikroploča se dodaju BTP uzoraka. VWF molekule su pričvršćeni na odgovarajućim antitijela i ostaju vezani prilikom pranja. U drugom koraku u analizi i izrade poliklonskih antitijela. Na sljedećoj fazi istrage u bunar hromogena rješenje je dodan. Ova supstanca je naslikana nakon enzim probavu. Intenzitet bojenja ovisi o sadržaju von Willebrand faktor.

Imunološki metoda za određivanje faktora von Willebrandov može biti implementiran pomoću rakete elektroforeza.

Koeficijent varijacije ELISA za određivanje vWF: Ag je manje od 10%.

Video: Određivanje krvne grupe i Rh faktor

Reagensa i opreme

• Wash Buffer koncentrat (pH 7.3).
• inkubacija buffer (PBS- pH 7.3).
• Liofilizirane standardima.
• Liofilizirane kontrolni uzorci niskog i visokog nivoa.
• Konjugirani poliklonskih antitijela.
• podloge rješenje.
• Stop rješenje.

Video: Blood (krvne grupe antigena, Rh) [To je jednostavno]

Distributer dijagnostički kit reagensa - CJSC "BIOHIMMAK".

Uzorci krvi za istraživanje

Da biste izvršili faktor test Willebrandove koristeći PPP.

tehnika performanse

Izgradnja kalibracije krivulje. Dalje potrebno je izgraditi krivu kalibracije pomoću linearnog grafa. Za konstrukciju krivulje kalibracije pomoću vrijednosti apsorbancije dobijena razrjeđivanje uzorka sa poznatom koncentracijom von Willebrand faktor. Na x osi se primjenjuje na koncentracije vWF: Ag u U / ml ili posto (1 U / ml = 100%), a na y osi pokazuje apsorpcije. U onim slučajevima u kojima postoje uzorci čija apsorpcije vrijednost veća od vrijednosti najvišeg kalibracije trenutku, oni moraju biti dodatno razrijediti s inkubacije buffer (1 + 1) i ponovo testirati. Tako je rezultat koncentracija mjerenje mora biti pomnožen faktorom razrjeđenja.

Evaluacija rezultata studije

Koncentracija vWF: Ag kod zdravih ljudi varira. Propisi ovise o verziji dijagnostički kit, opreme, krv, reagensi, i još mnogo toga, tako da ne postoji opšteprihvaćena normalnog raspona kada mjerenje ovog pokazatelja. normalnog raspona je obično navedeno u uputstvima proizvođača reagensa za određivanje von Willebrandov faktor, ali mnogi proizvođači preporučuju da svaka laboratorija uspostaviti vlastitu raspon normalnih vrijednosti. Važno je imati na umu da su prosječne vrijednosti nivoa ovog proteina sa I krvna grupa je oko 10% niži nego kod drugih pacijenata koji uvijek treba uzeti u obzir prilikom dijagnoze hemoragijske bolesti.

Uzroci grešaka

• Odsustvo ili neefikasnost sistema interne kontrole kvaliteta. Trenutno dostupni uzorci referentnih materijala certifikatom vrijednosti s von Willebrandov faktor. S obzirom na prisutnost fundamentalno različitih metodoloških pristupa za određivanje proteina, morate pažljivo provjerite verziju studije, za koji je certificiran test uzorak.
• Nepravilno doziranje citrata na ogradu venske krvi. Nedostatak natrija citrata zbog niskog hematokrita i hemolize dovesti do greške i nisu ponovljive rezultate.
• Hemolize.
• Povećanje vWF primijećeni u stresnim situacijama tokom vežbanja, trudnoće, krvarenja, hipertenzija, infektivne bolesti, estrogena terapija. Kod žena, u različite dane menstrualnog ciklusa može biti fluktuacija u koncentraciji von Willebrand faktor. Standardizacija hormonski uticaj na sadržaju multimeric proteina, neki stručnjaci preporučuju za dijagnosticiranje von Willebrandov bolesti u žena između 5. i 7. dan menstrualnog ciklusa.

Ostale analitičke tehnike

Na žalost, ne postoji ni jedan postupak kojim se može uzeti u obzir sve više varijanti ovog proteina anomalija, međutim za dijagnosticiranje VWD je razvio niz laboratorijskih testova. Osnovna istraživanja metode koje se koriste za identifikaciju nedostataka ili kvalitativne abnormalnost von Willebrandov faktor, zasnovan na upotrebi enzima tehnike imunoanaliza. Osim toga, za dijagnozu bolesti efektivno proučavanje funkcija agregacije normalnih trombocita tretiranih ristocetinom dodajući PRP istražena. U svrhu kvalitativnog poremećaja diferencijacije molekula ovog proteina dalje zaposlenih i drugih metodičkih pristupa.

Utvrđivanje ristocetinom-kofaktora aktivnost von Willebrandov faktor

Formalin tretira trombociti gube sposobnost za izvršavanje mnogih svojih funkcija, r. H. formiranje i funkcija jedinice kao odgovor na dodatak od najpoznatijih funkcija induktora agregacije, ali sa dodatkom ristocetinom u smjesi takvih trombocita i studija plazma oni brzo slijepljen. U ovom testu sistem težine aglutinacije direktno zavisi o prisutnosti von Willebrandov faktor, međutim sa smanjenjem koncentracije ovog proteina ili njegove kvalitete inferiornosti kao što aglutinacije slabo izraženi ili odsutni zajedno. Postoje dvije opcije prinitsipialno sličnu metodologiju za određivanje ristocetinom-kofaktora aktivnost von Willebrand faktor. Porijekla - kvantitativne, za njegovu realizaciju zahtijeva aggregometer, drugi - semikvantitativnog, to uključuje vizualnu procjenu vremena pojavljivanja agglutinates u dodatak razrjeđenja test plazme, i ristocetinom formalinom tretiranih trombocite. Obje metode imaju koeficijent varijacije manje od 10%.

Dijagnostičke metode potrebno diferencirati različite verzije von Willebrandove bolesti

Određivanje kolagena vezivanja aktivnost faktora von Willebrand. Adhezija trombocita na subendotelni kolagenih vlakana ostvaruje kroz trombocita receptora GP-IB / V / IX. Ova interakcija zahtijeva vWF kao kofaktor, tako da je na anomalije multimeric proteina ili njegovog nedovoljnog kapaciteta poremećeni trombocita vezivanja za kolagen receptore. Da bi se odredila aktivnost kolagena vezivanja zahtijeva set reagensa i opreme za obavljanje ELISA. Njegova koeficijent varijacije ne prelazi 15%.

Određivanje multimeric von Willebrand faktor. Moderni diferencijalna dijagnoza većine varijanti tipa 2 VWD se zasniva na proučavanju multimeric von Willebrand faktor. Da bi se procijenila sposobnost ovog proteina da se formira polimera sve više koriste imunološki elektroforeza. Postupak za utvrđivanje Multimeric prilično komplikovano, potrebna oprema za imunološki elektroforezu, pogodan za obavljanje u specijaliziranim laboratorijama rutinski obavljaju imuni elektroforeza, dijagnostički kompleti za njegovu realizaciju nije. Informacije o osjetljivosti i specifičnosti ove dijagnostičke metode u savremenoj literaturi se ne predstavlja, ali postoje izvještaji od tada nepoznate verzije multimeric proteina, što neki stručnjaci smatraju kao dijagnostički artefakata.

Određivanje agregacije trombocita sa ristocetinom (R1PA). Kršenje agregacije trombocita izazvane ristocetinom je česta laboratorija Willebrandove bolesti manifestacije. Ovo utjelovljenje za identifikaciju visoko specifičan nekretnine 2B von Willebrandov bolest u kojoj postoji abnormalno visok agregacije kao odgovor na dodavanje niske koncentracije ristocetinom. U drugim anomalije, ova metoda je samo od sekundarnog značaja, jer je Uobičajena doza može biti slomljena za različite oličenje ove patologije. Za implementaciju ove tehnike zahtijeva aggregometer i ristocetinom. Reproduktivnost studije agregacije s ristocetinom ovisi u velikoj mjeri o modelu aggregometer, iskustvo i obuku kadrova.

Video: Blood grupacije unakrsnoj vatri i Rh faktor