Metode laboratorijske dijagnostike. imunološke metode

Video: CMD - Centar za molekularnu dijagnostiku

Imunološke metode imaju važne dijagnostičke i prognostičke vrijednosti u mnogim reumatskih bolesti.

Studija nespecifičan imunitet uključuje istražuje broj leukocita i monocita u krvnom serumu, nadopunjuju komponente, procjena pokretljivosti, fagocitne i mikrobicidnu aktivnost mononuklearnih fagocita, proizvodnju proinflamatornih citokina (IL-ip, IL-6, TNF-alfa, i dr.).

razine povećanja dopuna je uočena kod akutne upale, zarazne procesa i smanjenje - u immunocomplex bolesti. Dakle, smanjenje koncentracije C2-Cs i dopunjuju komponenti u reakciji padavina sa antiseruma tipično za SLE, RA, ankilozantni spondilitis, vaskulitis, ulcerozni kolitis. To je zbog aktiviranja sistema komplementa zbog formiranja imunih kompleksa. Određivanje dijagnostički značajne komponente komplementa u sinovijalne tečnosti (sadržaj smanjuje RA) u likvoru (sadržaj smanjuje sa lupus tsereb-rovaskulite) u biopsije kože i bubrega.

Stanje ćelijski imunitet procjenjuje kvantitativne pokazatelje (apsolutno i postotak T-limfocita, aktivna T-limfocita, T-helper tip I i T-citotoksičnih limfocita) i funkcionalnih testova.

Najčešće se koristi:
&diams- reakcija leukocita migracije inhibicije (RTML) u prisutnosti antigena i mitogens: RTML sa fitohemaglutininom (PHA), concanavalin A (Con A), alergeni hemolitički streptokok, stafilokoka. Reakcija se temelji na imovinu limfocita s senzibilizacije na specifične antigene da formiraju stabilizaciju limfokina migracija inhibitorni leykotsitov- veća funkcionalna aktivnost limfocita, manji brojke RTML;
&diams- limfocita eksplozije transformacija reakcije (BTR), koji se procenjuje pomoću funkcionalne aktivnosti T-limfocita. Kao odgovor na mitogens (PHA), Con A i antilymphocytic serumu i dr. Limfocita transformacija javlja u limfoblasta (veća eksplozija ćelija se formira, to je veća aktivnost T-limfocita).
Subpopulacija T-limfocita utvrđene monoklonskih antitijela.

Za procjenu funkcionalnog stanja humoralnog imuniteta koriste kvantitativno određivanje imunoglobulina u krvnoj plazmi. Imunoglobulina (Ig) - su proteini koji imaju funkciju antitijela i podijeljen u pet glavnih klasa: IgG, IgA, IgM, IgD, IgE.

IgG prisutni u serumu u najveću koncentraciju (6,39-13,49 g / l), što čini 80% od aktivnosti antitijela. Razlikovati 4 potklasa IgG: IgG2 (60-70%), IgG2 (20-30%), IgG3 (5-8%) i IgG4 (1-3%).

IgA je glavni sekretorni imunoglobulin nalazi u pljuvački, suzama, bronhijalni i crijevnih sekreta i majčino mlijeko. Tajne IgA dimer je obrazac koji sadrži J-lanac, drugi peptid, zove sekretorni komponentu. Koncentracija IgA u standardnom je 0,7-3,12 g / l.

IgM se sastoji od 5 monomernih podjedinica povezao disulfidne mostove i J-lanac, formirajući pentamer. serum koncentracija IgM obično iznosi 0,86-3,52 g / l.

IgD je u tragovima u serumu, ali je osnovni tip imunoglobulina prisutnih na membrani B-limfocita. IgE igra važnu ulogu u reakcijama neposredne preosjetljivosti.

Da bi se odredila koncentracija glavnih klasa imunoglobulina (IgG, IgM, IgA) metodom radijalne immunodiffusion ili nefelometrijska tehnike, IgE - vrlo osjetljive radioimunoeseja ili enzim imunoanaliza tehnike.

Određivanje koncentracije imunoglobulina se koriste za dijagnozu primarne ili sekundarne imunodeficijencije (u ovim slučajevima, smanjenje koncentracije glavnih klasa imunoglobulina) i monoklonskih immunoglobulinopaty (u kombinaciji sa imunoelektroforezom serumu i urinu).

Najčešći oblik imunodeficijencije je IgA-immunodefi-op, čiji je razvoj se ponekad posmatra kod reumatskih bolesti, a može se odvijati u čijoj je pozadini određene lijekove (D-penicilamin, sulfasalazin, kaptopril i dr.). Povećanje koncentracije IgA često primijećeni u seronegativnih spondiloartropatijama, hemoragijska vaskulitis, Sjogren sindrom, psorijatični artropatije.

Često kod upalnih reumatskih bolesti se posmatra razvoj poliklonska Hyper.
Reumatoidni faktor (RF) su autoantitijela na Fc-fragment IgG, iako mogu biti povezani s IgM i IgA.

Možda blokiranje reumatoidni faktor autologne IgG, što dovodi do povećanja posto skrivene, RF kompleksni (sa produženim trajanjem reumatoidnog artritisa sa vistseritami).

Za identifikaciju RF klase M primjenjuju:
&diams- lateks aglutinacije reakcije inertni lateks čestica obložena ljudskim Ig. Najviši seruma razrjeđivanje davanje aglutinacije titra smatra reakcije. Titar 1:20 ili više smatra pozitivnim;
&diams- reakcija Vaaler Rosa s ovcama crvenih krvnih zrnaca obložene zec anti-ovaca crvenih krvnih zrnaca.

Najviši seruma razrjeđivanje davanje aglutinacija dijagnostički značajan, ako ne i manje od 01:32.
Lupus (L) -cells. Prisustvo LE-ćelija, zbog prisustva u serumu antitijela IgG klase u DNK-histona kompleks, koji reaguju sa jedrima su pušteni iz različitih ćelija kao rezultat uništavanje ovih ćelija. LE-ćelije se nalaze u 60-70% SLE bolesnika. Oni su zrele neutrofili, phagocytose nuklearne tvari uništenih ćelija. U citoplazmi neutrofila pronađena velika homogena uključivanje (hematoksilin zrnca).

U slučajevima nepotpune fagocitoze od neutrofila akumulirane oko tele hematoksilin u obliku utičnice (rozeta formiranje fenomen) je. Rezultat otkriti barem LE-5 ćelija na 1000 bijelih krvnih stanica se smatra pozitivnim. Jedinica iznos LE-ćelije se nalaze u 10% RA pacijenata, hronični aktivni hepatitis, alergije droga, Periarteriitis nodosa, sistemski sklerodermija, JDM, bolest mješoviti vezivnog tkiva.

Antinuklearnih antitijela (AHA) najčešće definiše u reumatskih bolesti i javljaju se u više od 90% pacijenata SZST. Oni su porodica autoantitijela u interakciji sa ribonukleinske kiseline i proteina, jezgro, citoplazme antigene. AHA određuje indirektne imunofluorescencije, dvostruko immunodiffusion i kontrelektroforeza, ELISA i imunoblot.

Kada metodom indirektne imunofluorescencije u praksi, postoji šest tipova za bojenje ili luminiscencije, jezgra koji su važni za dijagnozu sistemske bolesti vezivnog tkiva:
&diams- homogena bojenja zbog prisutnosti antitijela na dvolančane DNA i histona, najkarakterističnije SLE i lupus doza;
&diams- periferne bojenje uzrokovane kruži antitijela na nuklearne membrane (konkretno za SLE);
&diams- zrnastim bojenje se najčešće javlja, što ukazuje na prisustvo različitih AHA, tako da ima najniži specifičnost (što je navedeno u SLE, RA sa visceralne manifestacijama, bolest mješoviti vezivnog tkiva);
&diams- nukleolarnih (nukleolarnih) luminiscencije zbog komponente antitijela nukleolusom javlja u SSC, bolesti Shegrena- ANF povremeno naći u endokrine bolesti (poliendokrinopatiya, tip I dijabetes mellitus, tireoiditis, tireotoksikoza), kožne bolesti (psorijaza, pemfigus), kao i pozadini trudnoće nakon transplantacije organa i tkiva (u razvoju reakcije "graft versus host"), kod pacijenata na hemodijalizi;
&diams- centromerni luminescence je uočena u izgledu antitijela na centromere kromosoma (karakteristično hroničnosti MIC);
&diams- citoplazmatske svjetlo ukazuje na prisustvo antitijela protiv tRNA sintetaze, posebno Jo-1 (uobičajena u dermatološkim i polimiozitis).

Metode radioaktivnih i imunološkog obavezujuće, radijalne immunodiffusion, Imuniprecipitaciona otkrio AHA specifičnim nuklearne antigene.

Antitijela na dezoksiribonukleinske kiseline (DNK). Antitijela na nativnu (dvolančanu) DNK, posebno one koje su otkrivene od strane radioimunoeseja testovi (Pharr metoda), relativno specifična za SLE. Njihova definicija je od suštinskog značaja za procjenu aktivnosti bolesti, predviđajući razvoj egzacerbacije i efikasnost terapije. Antitijela na denaturisan (jednoslojni) DNK manje specifična za SLE i često otkrivene u drugim reumatskim bolestima.

Antitijela na histona. Histona - ključna komponenta, koja se sastoji od tri podjedinice: dva dimera H2A-H2B da okružen NS-H4 tetramernih i povezane sa trećim podjedinice koja se sastoji od dva okreta DNK molekula.

Antitijela na histona H2A-H2B se nalaze u gotovo svih pacijenata s lupusom drogom sindromom (inducirana novokainamidom), u pacijenata koji su primali prokainamidom, ali nemaju simptome lupusa, kao i 20% pacijenata sa SLE.

Antitela na ribonucleoprotein (RNP). Antitijela na ribonucleoprotein čine anti-Sm, anti-snRNP (U1RNP), anti-Ro / SS-A, anti-La / SS-B, nalazi u SLE ukupno više od antitela da udvostruči-DNK. koncentracije u krvi ovih antitijela je vrlo visoka. Pronađeno u bolesti mješovitim vezivnog tkiva, barem - u bolesnika sa SLE, koji predvodi klinička manifestacija lezija kože, subakutni SSD i drugih autoimunih reumatskih bolesti.

Antitijela na Sm (Smith) -antigenu. Antitela na SM-antigen se može naći samo u SLE. Metodom imunofluorescencije su identifikovani u 30% slučajeva, a 20% - prema načinu hemaglutinacija. Antitela na SM-antigen nije otkriven u drugim reumatskih bolesti, tako da se smatra kao markeri SLE antitijela i njihovo otkrivanje je jedan od dijagnostičkih kriterija za bolest. U prisustvu Sm-antitijela je uočena za maligne bolesti, centralnog nervnog sistema, lupus psihoze i relativna očuvanje bubrežne funkcije. Međutim, nivo antitela na SM-antigen nije u korelaciji sa aktivnostima i kliničke podtipova SLE.

Antitijela na Ro (Robert) / SS-A su usmjerene protiv nuklearnog ribonukleoproteini, koji su povezani sa Il-Y5 citoplazmatski RNA, transkribovalo RNK polimeraze III. Ovisno o osjetljivosti metode koje se koriste za proučavanje antitijela Ro / SS-A nalaze se u 60-78% pacijenata sa Sjögrenov sindrom, u 96% pacijenata sa Sjogren bolesti i 35-57% bolesnika sa SLE.

U SLE proizvodnju antitijela podatke povezane sa specifičnim skup laboratorijske i kliničke manifestacije poremećaja: fotosenzitivnost, Sjogren sindrom, oštećenje pluća, limfopenija i trombocitopenija hiperprodukcije RF. Povećanje koncentracije antitijela na Ro / SS-A u kombinaciji sa hiper IgM RF često se posmatra u ANF negativan podtip bolesti (u 2-5% bolesnika sa SLE) - tzv subakutni kožni lupus.

Antitijela na La (Lane) / SS-B usmjerena protiv proteina povezanih sa transkriptima RNK polimeraze III. Antitijela na La / SS-B u većini slučajeva se javljaju u kombinaciji sa antitijela na Ro / SS-A, dok je potonji se može javiti u izolaciji. Antitijela na La / SS-B nalaze se u bolesti i Sjogren sindrom, u kombinaciji sa RA i SLE (ali ne i sistemska sklerodermija), i primarna bilijarna ciroza. U SLE antitijela na SS-B / La-antigen se češće javljaju u ranoj fazi bolesti, koja se razvija u starosti, a povezana je s nižim učestalost razvoja nefritis.

SCL-70 antitijela se obično otkrivene u difuzni oblik sistemske skleroze. U to prisustvo bolesti Scl-70 antitijela u kombinaciji s genima kočija HLA-DR3 / DRw52 17 puta veći rizik od razvoja plućne fibroze. Otkrivanje Scl-70 antitijela u bolesnika sa izolovanim Raynaudov fenomen ukazuje na visoku vjerovatnost razvoja sistemske sklerodermije.

Antitsentromernye antitela (ASA) pronađeno 20% pacijenata sa sistemska skleroza (većina njih postoje dokazi o CREST-sindrom), barem - u primarna bilijarna ciroza (pola od ovih pacijenata, postoje znaci sklerodermija), a vrlo rijetko - u hronični aktivni hepatitis i primarna plućne hipertenzije. Antitijela protiv centromere smatrati nepovoljan prognostički pokazatelj razvoja sistemske skleroze kod pacijenata sa Raynaudov sindrom.

Antitijela na aminoatsilsintetaze tRNA (antisintetaznye antitijela) su otkrivena u prisustvu bolesnika sa polimiozitis intersticijske bolesti pluća. U principu sintetaze antitijela su otkriveni u 40% pacijenata sa polimiozitis, 54% pacijenata sa idiopatskom JDM u slučaju oblika ove bolesti, a samo 6% pacijenata sa polimiozitis, jedna od druge manifestacije u tumor DBST- miozitis ovih antitijela nisu otkriveni. Proizvodi antisintetaznyh antitijela je povezana sa razvojem takozvanih "antisintetaznogo sindrom".

Antifilaggrinovye antitela (aPL) su porodica, koja uključuje antikeratinovye antitijela antiperinuklearny faktor antitela Sa-antigena i antitijela na nedavno opisao ciklički peptid citrulin sadrže. Prema modernim konceptima, glavni antigenske determinante priznata od strane ovih antitijela je citrullinated peptida, koji, posebno prisutan u sinovije bolesnika s reumatoidnim artritisom (RA). AFA su visoko specifična za RA. Najkorišteniji su AFA u dijagnostici ranog RA. Nekoliko studija je pokazalo agresivniji tok RA u prisustvu ovih antitijela u bolesnika.

Antitijela na fosfolipidi (APL) - heterogena grupa autoantitijela koja reagiraju s negativno napunjena (Fosfatidilserin, fosfatidilinozitolni, kardiolipinska) i neutralnom (phosphatidylethanolamine, fosfatidilkolin) fosfolipidi. To uključuje lupus antikoagulans, kardiolipinska antitijela i faktora koji određuju razvoj lažno pozitivnih Wasserman.

Lupus antikoagulans (LA) - imunoglobuline klasa IgG i / ili IgM, inhibiraju in vitro jedan ili više fosfolipidzavisimyh reakcija koagulacije, BA se tretira kao predstavnik porodice antitijela na fosfolipide, njihovu sintezu je povezana sa razvojem arterijske ili venske tromboze.

Antikardiolipin antitela (aCL). Da bi se utvrdila CLA koristi Immunoassay metoda. CLA proizvoda (posebno kada su visoke titar IgG ACL), kao i formiranje BA, povezana je sa razvojem antifosfolipidnim sindroma.

Lažno pozitivnih Wassermann reakcija je brza serološki dijagnozu sifilisa metodom na osnovu standardnih cisterne flokulacija fosfolipida (kardiolipinska) u serumu pacijenta koji sadrži anti-treponemal antitijela (Reagin). Za preciznije dijagnoze sifilisa metodom imunofluorescencije treponemal antigena.

U 15-20% bolesnika sa SLE se otkrije lažno pozitivnih Wassermann reakcije, a 30% zdravih osoba sa lažno pozitivnih Wassermann reakcije u narednim SLE u razvoju. Vrlo često lažno pozitivnih Wasserman otkrivene kod pacijenata sa antifosfolipidnim sindromom.

Antineutrofilna tsitoplazmatineskie antitijela (ANCA). ANCA su familija autoantitijela usmjerena protiv specifičnih antigena prisutna u citoplazmi neutrofila. Postoje dvije vrste ANCA koji je utvrdila indirektnom metodom imunofluorescencije koristeći fiksni neutrofili apsolutnog alkohola donatora. Antitijela da izazove difuzno proteinazni III (klasična) i citoplazmatski sjaj označava kao k-ANCA ili p-ANCA. Antitijela protiv mijeloperoksidaza, elastaza i laktoferin karakterizira perinuclear tip emisije i označen kao perinuclear ili p-ANCA. ANCA su često otkrivene u sistemski vaskulitis.

Streptokokne infekcije antistreptococcal uzrokuje povećanje titar antitijela. Određivanje antistreptococcal antitijela se koriste za dijagnozu akutne reumatske groznice (akutne reumatske groznice) i akutne glomerulonefritis.

Većina naširoko određivanje antitijela na streptolysin O (ASL-O), streptokinaza (ACK) i streptodezoksiribonukleaze (anti-DNase B). Povećanje titar SLA-O se nalazi u više od 2/3 bolesnika s akutnim reumatske groznice, a samo polovina pacijenata sa akutnim glomerulonefritis. Maksimalna titar antistreptococcal antitijela identifikovane tokom razvoja artritisa i tokom razvoja carditis i drhtanje titar ovih antitijela su značajno smanjeni, čime se smanjuje dijagnostička vrijednost ovog testa.

Važni za dijagnozu su detekciju reakcije antitijela nakon infekcije: Wassermann reakcija, nadopuniti fiksacija reakcija sa tuberkuloze, pseudotuberculosis, Yersinia, Shigellosis i druge antigene, HBs-antigeni, gonokoknu (Bordet-Gengou reakcija) i bruceloza (reakcija Wright-Heddlsona) antigena titar anti-Klamidija antitijela.

Krioglobulina - grupa seruma proteina sa abnormalnim sposobnost da reverzibilni padavina ili stvaranja gela na niskim temperaturama. Krioglobulina može biti otkriven u raznih bolesti unutrašnjih organa, uključujući i vrlo često u sistemskim reumatskih bolesti.

Ovisno o sastavu krioglobulina je podijeljena u tri glavne vrste. Tip I se sastoji od monoklonskih imunoglobulina IgA ili IgM, barem - monoklonskih laki lanci (Bence Jones proteina). Tip II (posmatrano u tzv mješoviti cryoglobulinemia) sastoji od monoklonskih imunoglobulina (obično IgM, rijetko - IgA ili IgG), antiglobulinski imaju aktivnost protiv poliklonskim IgG. Tip III (posmatrano u tzv mješoviti cryoglobulinemia) se sastoji od jedne ili više klasa poliklonskih imunoglobulina. Najčešći oblik cryoglobulinemia u reumatskih bolesti je on III tipa se nalazi u SLE, RA, sistemska skleroza, Sjogren sindrom.

Cirkuliše imuni kompleksi (CIC). Povećanje koncentracije odražava CIK-upalni i imunološki aktivnost patološkog procesa u SLE, RA, seronegativnih spondiloartropatijama.

VI Mazur

Udio u društvenim mrežama:

Povezani