Ctarenie u ćeliji kulturama

Video: Jeunesse Global finiti ™ Cellular starenje završava ovdje

Korištenje ćelijske kulture u Gerontološkom nudi jedinstvenu priliku za proučavanje mehanizama starenja i saznajte uticaja koji utiču na ovaj proces.

Konkretno, metoda ćelije kulture omogućava riješiti sljedeće važne zadatke.

1. U odnosu kulture ćelija dobijenih od donatora različite dobi, moguće je da se napravi razlika između promjena konstitutivnih izazvane povezanih sa starenjem. Na primjer, utvrđeno je da je mitotska aktivnost ljudskih fibroblasta kultura koje su pod istim uvjetima, smanjuje sa povećanjem starosti donatorskih ćelija (Schneider, Mitsui, 1976- Schneider, 1979).

Shodno tome primijećeni u starosni tkivima organizama smanjenje mitotska aktivnost (Gelfant, Smith, 1972- Cameron, Thrasher, 1976) povezan sa konstitutivni ćelije promjenu sebe.

S druge strane, povećanje povezanih sa starenjem u indukciji periodu tirozin jetra pod dejstvom hidrokortizon (Adelman, 1972) treba uzeti u obzir izazvane zbog različitog uzrasta u kulturama hepatocita štakora se uočene razlike u indukciji enzima (Britton et al., 1976). Dakle, aplikacija omogućava ćelije kulturama kako bi se utvrdilo prirodu starenja.

2. Način kulturi ćelija pruža jedinstvenu priliku za istraživanje i pažljivo proučavanje konstitutivnih biohemijskih (Vilenchik et al., 1979) i citologiju (Schneider, 1979), povezanih sa starenjem promjene. Ova metoda omogućuje vam da direktno provjeriti teoriju starenja (Danner et al., 1978).

3. Komparativna studija ćelijske kulture izvedene iz različitih životinja, čini moguće utvrditi karakteristike ćelija od posebnog interesa za biologiju starenja. Na primjer, utvrđeno je da su životinje pozitivno korelira sa prostate fibroblaste u kulturi sposobnost za popravak UV-inducirana oštećenja DNK (Hart, Setlow, 1974) i negativnoj korelaciji s intenzitetom vezivanja kancerogena na DNA fibroblasta ovih životinja (Schwartz, Moore, 1977, 1979). Stoga, mehanizmi za zaštitu genoma od oštećenja su gerontološkim posebnog interesa.

4. Dugoročni kulture (oko godinu dana) in vitro ćelije mogu modelirati mnoge promene koje se dešavaju tokom starenja. Iako je pitanje adekvatnosti in vitro uvjetima uvjetima in vivo ostaje otvoreno pitanje, starenja ćelija kulture je posvećen povećanju broja eksperimentalnih, pregled (Hay, 1967- Bershad, Gelfand, 1970- Cristofalo, 1972- Hayfiick, 1977- Gavrilov, Gavrilova, 1978) i teorijski rad (Olovnikov, 1973- Holliday, 1975- Hirsch, 1978- Gavrilov, Yaguzhinskii, 1978).

Kriterije i razloge za smrt ćelijske kulture

Trenutno instalirani Limited očekivano trajanje života (RV) sljedeće ćelijske kulture normalnih fibroblasta ćelija ljudskog (Hayfiick, Moorhead, 1961- Hayfiick, 1965- Harper, Grove, 1979), konji, nekoliko vrsta kengura (Stanley et al, 1975.), torbari Potorous tridactylus (Cristofalo, 1972- Stanley et al, 1975), kornjače (Goldstein, 1974), kune (Hayfiick, 1975), piletina (Kaji, Matsuo, 1979) i miša (Hayflick, 1975, 1977.) - epidermalnih keratinocita (Rheinwald, Green, 1977), mobilni glija (Brunk`et al., 1973) i ljudske jetre (Kahn et al., 1977a, 1977b) normalnih hondrosita (Mayne et al., 1976) i Rous sarkoma virusa transformiran chick fibroblaste (Ponten, 1970- Leblond-Larouche, Morais , 1976).

Međutim, kritičke analize podataka iz literature (Gavrilov, Gavrilova, 1978), čini se da još uvijek ne postoji opšteprihvaćena kvantitativni kriteriji za mobilne kulture smrti, i sami koncepti - "smrt" i "životni vijek" kulture - veoma uslovna i subjektivne.

Većina istraživača se zove kultura mrtav ako u roku od proizvoljno podešenog vremenskog intervala (obično 1-4 nedelje) prestaje da poveća svoju snagu na željenu vrijednost, bez obzira na povoljne uvjete za rast (obično postavljen broj, 2-4 puta broj inicijalnih kulture) .

Prema ovoj definiciji, smrt ćelija u kulturi nije potrebno, kao i svaka kultura održivih ali ne i podjele ćelija, po ovoj definiciji, može smatrati mrtvim. Osim toga, kultura mrtvih i dalje polako raste, iako imaju nizak mitotska aktivnost i sadrže samo 10-20% ćelija sposobna replikativnu sinteze DNK (Cristofalo, Sharf, 1973- Milo, Hart, 1976).

Takve kulture se ponekad spontano oporavi normalan rast i onda napraviti nekoliko dupliranja stanovništva prije sljedećeg "smrt» (Holliday, Tarrant, 1972). smrt mase ćelija na kraju kulture života, što pridaje veliki značaj ranih radova (Hayfiick, Moorhead, 1961- Hayfiick, 1965), bio je artefakt ponovnu sjetvu rada.

Činjenica da je gajenje ćelije redovno potkulturom, t. E. U prilogu obradu podloge ćelije sloj 0,1% rastvor tripsina (trypsinization) i razdvajanje ćelija odvojite jedan formaciji po hidrodinamički efekata (suspenziju).

U prvom die velika ćelija (Milo, 1973), u kojoj je većina starih i mrtvih kulturama (Bowman et al., 1975- Mitsui, Schneider, 1976). Osim toga, u tim kulturama povećao broj kontakata ćelija, koje se ne može uništiti u toku kultivacije, bez oštećenja ćelija sami (Milo, 1973).

Stoga, pod uvjetima sporog rasta kulture na konstantnoj uništavanje ćelija u procesu presađivanje utisak potpune lize. U onim slučajevima kada se isključi utjecaj ponovnu sjetvu operacija, nema povećanja stope smrtnosti ćelije iz doba kulture nije uočena.

Shodno tome, ograničena pankreas kulture stanica isključivo izazvala pad mitotska aktivnost, i bez gubitka samih ćelija. Osim toga, postoji razlog za pretpostavku da je smanjenje mitotska aktivnost je uzrok većine morfološke i biokemijske promjene uočene u ćelijama starih i mrtvih biljaka.

Na primjer, utvrđeno je da je opisano na kraju života kulture "degenerativnim" ćelije koje pridaje veliki značaj u ranim studijama (Hayfiick, Moorhead, 1961- Hayfiick, 1965), ne izazivaju, kao posljedica smrti kulture, t. E. Smanjite mitoze aktivnost. Utvrđeno je da su mnoge od takozvanih "degenerativne promjene" mogu se dobiti u mladoj kulturi, potisnuta na duži period od deobe ćelija.

Sve ove "degenerativne promjene" nestati nakon nekoliko dupliranja stanovništva, ako ponovno stvoriti uvjete za rast usjeva (Brunk et al., 1973). Povećanje veličine ćelija u starenja kulturama i navodno uzrokovana usporavanje i zaustavljanje podjele ćelija. Zaista, povećanje u veličini uočena samo u ćelijama koje ne sintetizirati DNK (Bowman et al., 1975).

Ove činjenice ukazuju na to da je problem kulture ćelija starenja u suštini svodi na proučavanje uzroka, mehanizme i posljedice posmatrane smanjenja mitotska aktivnost.

Ovaj proces ne mora nužno dovesti do oštećenja i starenje stanica i može biti posljedica njihove diferencijacije (Gavrilov, Gavrilova, 1978- Gavrilov, Yaguzhinskii, 1978), koja je često praćena smanjenjem mitotska aktivnost (Truman, 1976). Prema tome, pojam "smrti", "smrt", "starenje" i "životni vijek" ćelijske kulture su izuzetno uslovna, kao i koncept "mladih" i "starih" kulture.

Njihovi setovi upotreba istraživača za proučavanje mehanizama poremećaja i povreda, iako je samo postojanje tih povreda i poremećaja u staničnoj kulturi nije dokazano, a nije utvrđena njihova uloga u smanjenju mitotska aktivnost.

Stoga, preporučljivo je koristiti i druge termine koji bi se fokusirao pažnju istraživača je na ono što se stvarno događa, to je. E. na smanjenje mitotska aktivnost. Takvi termini su već uvedene.

Umjesto toga, koncept "života", "starenje", "smrt" i "smrt" je predložio da se koriste termini "replikativnu životni vijek" staničnoj kulturi "replikativno starenje", "smrt replikativnu" i "replikativnu smrti" kulture ćelija.

Koncept "mladih" i "starih" kultura se sada koristi uz pridjev "replikativnu". Young (razdvajanja) ćelije nazivaju replikativnu, i stari i mrtvi (bez podjele) - postreplicative.

Za sažetosti, stari koncepti ponekad stavlja u navodnike, naglašavajući njihove konvencije (Norwood et al., 1974 Gavrilov, Gavrilova, 1978). Značajno je da je čak i sada biološka starost kulture određen je postotak ćelija koje nisu u stanju da replikativnu sinteze DNK (Cristofalo, Sharf, 1973- Bowman et al., 1975).

U ovom trenutku, teret utvrdilo sljedeće osnovne manifestacija "starenja" ćelijske kulture.

1. Smanjena proporcija ćelija sposoban dijeljenja (Merz, Ross, 1969- Cristofalo, Sharf, 1973).

2. Povećanje period mitoze ciklusa. Radioautographic detektuje povećanje minimalne periodu generacije ćelija u kulturama humanih fibroblasta od 16 do 21-22 sati (Macieira-Coelho et al., 1966). Cinematic studija je pokazala porast od prosječno vrijeme između oznaka za "stari" ljudska kulturama fibroblasta 16,8-32 sati (Absher et al., 1974).

3. "starenje" kulture stanica poboljšane inhibitorni učinak naseljenosti na stopu rasta (Macieira-Coelho et al., 1966- Absher et al., 1974 Schneider, Mitsui, 1976), tako da je gustoća zasićenja na ponavljanje starih kultura je približno 2 puta manji od "mladih" kultura (Schneider, Mitsui, 1976).

Udio u društvenim mrežama:

Povezani