Osnovni principi citogenetske prenatalne dijagnostike.

trenutno, problem citogenetičkom dijagnostika u bilo kojoj fazi trudnoće je praktično riješen. Razvijen pouzdan i efikasne metode hromozoma analize fetalnih ćelija i embrionalnih membrane. Ovisno o trajanju trudnoće i ciljeva studija materijala za analizu kromosoma mogu poslužiti AF ćelije, horion, placente i fetusa krvi pupčane vrpce limfocita, dobijene na neki način invasin. U našoj se najčešće koristi centar horion ćelije (I termin) ili placente ćelija (II trimestru) dobila transabdominalnom preko horionbiopsii ili platsentotsenteza. Hromozomske preparata iz placente ili horionske tkiva priprema direktne ili indirektne metode prethodno detaljno obrađeno u metodološkim preporukama i odgovarajuće vodič.

Prednosti i mane citogenetičke analize kada se koriste različite metode dobivanja kromosomskih preparata iz fetusa uzoraka materijala prikazani su u tabeli.

Koristiti u većini centara kompleks citogenetičkom i molekularne citogenetske dijagnostičke metode pruža najviše potpune informacije o kariotip ploda u različitim fazama razvoja fetusa.

Video: Citogenetski studija. Biopsija horionskih resica propuštenih abortusa

Kada prenatalni kariotipizacija To treba da se rukovodi principima analize kromosoma droge međunarodno prihvaćenih kliničkih citogenetika i odobrena od strane Ministarstva zdravlja, kao i pravila međunarodnog nomenklature opisuje carnotite.

Ima citogenetske analize ćelija razne fetusa porijekla ćelija plodove vode Ćelije AF zastupa nekoliko vrsta različitog porijekla:
- ćelije amnionske membrane (zapravo amniocita)
- fetusa epitelnih stanica (epidermis, gastrointestinalni, genitourinarnog i respiratornog trakta, sluznice usne šupljine).

Video: Roditelj Club (25.11.2015 - Part 1)

Kvalitativni i kvantitativni sastav AF ćelije, a koncentracija živih ćelija imaju individualne varijabilnosti i ovise o fazi razvoja. Optimalno za citogenetske istraživanja je plodove epitel - aktivno razmnožavaju ćelija klon specifične za određene kulture. U međuvremenu preciznu identifikaciju tipova ćelija sposobna mitotsku podjela i klonoobrazovaniyu pod in vitro staničnoj kulturi, vrlo teško.

Najčešće za uzgoj rabljene plodove ćelije dobiti u periodu od 15-18 nedelje trudnoće. Upotreba za tu svrhu amniocita ranije (12-14 tjedna trudnoće) ili kasnije (nakon 20 tjedna trudnoće) smislu je moguće u principu, ali u pravilu, znatno otežava i produljuje dijagnostičkom postupku, povećava se broj neuspjelih pokušaja.

Standard kultivacije ćelije AF uključuje sljedeće korake: postavljanje kulture, subkulture, hipotonična tretman, i fiksacija. Uprkos široku upotrebu ćelijske kulture AF na svijetu, uobičajena tehnika za hromozoma pripreme su nepostojeće. Za gajenje ćelije AF koriste dva glavna pristupa razlikuju u načinu za proizvodnju kolonije i metode fiksacije.

Video: nova generacija sekvenciranja: načela, mogućnosti i perspektive - Maria Logacheva

1. Pljosku-Način ćelija kulture Pacijenti u suspenziji i fiksacija monolayer kulture nakon trypsinization. Analiza se vrši u dva od tri kulture (10 metafaza po uzorku). Ako su svi metafazi tablice poštovati isti kariotip, dijagnoza je uspostavljena. U slučaju jednog metafazi sa nenormalno kariotip (strukturne ili numeričke) analizirano je backup treće kulture. Ako se jedna te ista hromozomskih aberacija određuje više od jednog metafazi iz jedne boce, ali ne i potvrđeno u drugim boce, dijagnoza "psevdomozaitsizm". U slučaju istog kromosomskih abnormalnosti u više od jedne boce, dijagnoza je "pravi mozaicizam".

2. Metoda in situ - uzgoj i fiksacija ćelija na pokrovna u Petri ili posebne boce - tobogani. Analiza je izvedena na metafazi pločama od tri kulture jela (ukupno 10 kolonija analiziranih). Kada otkrivanju abnormalnih klon analizirani vsekultury. Hromozomskih aberacija primijećeni u samo jednoj posudi, ukazuje na "psevdomozaitsizme", više od jedan - "pravi mozaigshzme".

standardni proces kultivacije amniocita od dana prijema uzorka pa sve do kariotipizacija u prosjeku 14-21 dana traje. Nedostaci su visoki troškovi kulture bujona i opreme, što je važno za domaće laboratorije, kao i visoki (do 2%), vjerovatnoća kontaminacije uzorka majku izvedene ćelija.

U posljednjih nekoliko godina, razvio novi pristup kromosom analiza u kulturi ćelija. «Pipett» Metoda se bazira na izolaciji mikromanipulyatsionnoy metafaznyhiprometafaznyhkletokiz nesuspenzionnyh nasade ihmorfologicheskim karakteristike i slabljenje zbog podloge. Dalje hipotonična tretman i fiksacija se sprovode na pojedinačne ćelije. Ova metoda smanjuje period kulture neskolkihdney i, što je značajno smanjiti rizik od dijagnostičke greške uzrokovane oba mozaicizam, i kontaminacija uzorka. Priprema prometaphase i metafazi ploča na taj način može bilo primarni i transplantiranih usjeva. Nažalost, skupe opreme i radne snage spriječiti široko usvajanje ove progresivne metode u kliničkoj praksi.