Kriterijumi kvaliteta immunoassay hormona

Ili način trebaju biti konkretni, osjetljiva, precizno i ​​imaju dobru reproducibilnost. Osim toga, metoda analize treba razvijati tako da je moguće mjerenje razine hormona u serumu i pune krvi i plazme, a ponekad u urinu i pljuvački (u slučaju, na primjer, steroide). Još jedan važan kriterij - minimalni broj i maksimalnu jednostavnost rada koji se obavlja laboratorijskog osoblja. Svi ovi kriteriji su dizajnirani do najmanjeg detalja do kraja 1960. Zato ćemo napraviti nekoliko primjedbi i komentara.

specifičnost

To je najvažniji pokazatelj kvaliteta bilo koje metode imunoanaliza. Specifičnost se može odrediti kao sposobnost metode da otkrije samo određeni uzorak (analita) supstance i ne otkrije nikakve strane tvari, čak i vrlo slične strukture s njim. Drugim riječima, specifičnost - sposobnost metode da bi minimalan broj lažno pozitivnih rezultata. Specifičnost imunoanaliza se određuje prvenstveno specifičnost primarnih antitijela. To bi trebao biti posebno visoka kada hormona suđenja sa istim ili sličnim antigenske determinante. Na primjer, adenogipofizarnye hormona FSH, LH, TSH i hCG se sastoji od dva polipeptidna lanca - Calamus, pri čemu lanac su identične. Ako analiza bilo kojeg od ovih hormona, kao što su FSH, kao primarna antitijela koriste nizkospetsifichnuyu poliklonskih antiseruma, većina antitijela veže za-lance sve četiri hormona, tako da je rezultat mjerenja je lažno pozitivan. Ovaj fenomen se zove cross-reaktivnost. Cross-reaktivnost je uočena pri mjerenju prolaktin, koji pripada istoj porodici sa hormonom rasta i placente laktogen (svi ovi hormoni su vrlo slične N-terminalni kiselina sekvenca amino).

Specifičnost poliklonska primarnih antitijela se može podići od immunoadsorption koloni antiseruma sa relevantnim antigene. Ovaj pristup je u širokoj upotrebi pre pojave hibridoma tehnologije. U ovom trenutku kao primarnog antitijela se gotovo uvijek koristi visoko specifična monoklonska antitijela koji se vezuju za antigenske determinante jedinstven za ovaj hormon.

Specifičnost je imunohemijska analiza ne ovisi samo o svojstvima primarnog antitijela, ali i iz mnogih drugih, ponekad nepredvidljiv faktora. Konkretno, specifičnost može biti smanjena zbog cross-reakcije s primarnim antitijelima, neki nepoznati komponenta u test uzorku seruma ili plazme. Postoje trenuci kada neki od proteina sirutke konformaciju promjene i zbog toga on postaje antigeni sličnost sa analizirani hormona. Konačno, serum komponente mogu biti uvedene u aktivnom lokacijama primarnih antitijela i smanjiti specifičnost njihovog vezivanja za antigen. Odgovor imunološkog ispitivanja tehnologije, postoji nekoliko načina da se spriječi cross-reakcije, međutim, nemoguće predvidjeti sve iznenađenja.

Video: Live zdrav! Liječenje muške neplodnosti

Većina imunohemijski test sistema za mjerenje nivoa hormona u pojedinim ljudskim tjelesnim tekućinama (serum, plazma, urin, pljuvačka). U skladu s tim, specifičnost testa sistema uspostavljeni za ove biološke tekućine. Ako se koristi takav test sistemi za in vitro analize hormona, kao što su nakon inkubacije endokrinog ćelija u Krebs pufera ili Ringer ili u bilo kojoj kulturi medij, potrebno je provjeriti svoje specifičnosti, posebno u takvim "nenormalnim" uvjetima.

osjetljivost

Osjetljivost imunohemijske testa može se definirati kao minimalna koncentracija supstance koja se može mjeriti na ovaj način. Da bi se procijenila osjetljivost koristeći standardni uzorak sa poznate koncentracije hormona ili drugih antigena. Ovaj uzorak je pripremio serijski razrjeđenja uzorka sa smanjenjem koncentracije hormona. Dakle, osjetljivost testa sistema je direktno proporcionalna stepenu razvodnjavanja standardnog uzorka, sa kojima je moguće dobiti precizan rezultat mjerenja. Osjetljivosti imunohemijski test sistem prvenstveno zavisi od afiniteta primarnog antitijela, koje se koriste u njemu. Osim toga, osjetljivost ovisi o vrsti imunološkog ispitivanja, na kojem je test sistem dizajniran. Općenito, test osjetljivosti sistemi zasnovani na RIA je veći od test analize sistemi bazirani immunohemilyuminestsentnogo i ELISA.

Video: Što je hrana? 5 Kriteriji. Sirovu hranu, fruktoedenie

Da bi se procijenila osjetljivost koristeći standardni uzorak sa poznate koncentracije hormona ili drugih antigena. Ovaj uzorak je pripremio serijski razrjeđenja uzorka sa smanjenjem koncentracije hormona. Dakle, osjetljivost testa sistema je direktno proporcionalna stepenu razvodnjavanja standardnog uzorka, sa kojima je moguće dobiti precizan rezultat mjerenja.

Osjetljivosti imunohemijski test sistem treba da bude takav da se može koristiti za mjerenje razine hormona se nalazio ne samo u normalnom rasponu koncentracija, ali i ispod ovog opsega. Stoga test sistema dizajneri nastoje da se postigne osjetljivost između 3. i 5. percentila ili standarda u rasponu između dva i tri standardna odstupanja od donje granice normale. Na primjer, raspon normalne koncentracije LH kod žena je 1,1-77 IU / L (2,3 162 pmol / L). Shodno tome, osjetljivost testa sistema za mjerenje LH bi trebao biti oko 0,4 IU / L (0.84 pmol / L). Ova visoka osjetljivost je posebno važno kada je potrebno za mjerenje niskih koncentracija LH, posebno za diferencijalnu dijagnozu primarne amenoreje. U ovoj situaciji, razine LH ispod 10 IU / L ukazuju na sekundarne (hipogonadotropni) hipogonadizam, dok viši nivo - primarnim hipogonadizam. Imunohemijski test sistem mora imati visoke osjetljivosti i u onim slučajevima u kojima želite da hvataju čak i najmanje promjene u koncentraciji hormona. Najčešće se ovaj problem nastaje u planiranju i procjenu efikasnosti hormonske terapije. Na primjer, u liječenju hipotireoze doze levotiroksina odabranih TSH mjerenja. Normalno TTG nivo varira između 0,4 i 4 mIU / L (2,9-29 pmol / l). dok moderni test sistemi za mjerenje TSH imaju osjetljivost bolji od 0,01 mU / L (0.073 pmol / l). Ponovljeno vrlo osjetljivi mjerenja TSH omogućiti endokrinolog vrlo precizno prilagoditi dozu levotiroksina.

Osjetljivost testa sistema ovisi prvenstveno na afinitet primarnog antitijela, koje se koriste u njemu. Osim toga, osjetljivost ovisi o vrsti imunološkog ispitivanja, na koji se razvija test sistema (RIA immunohemilyuminestsentny analiza, ELISA). Osjetljivost RIA i immunohemilyuminestsentnogo analiza općenito veća nego osjetljivost ELISA, kao što je u prva dva načina imunohemijska reakcije se odvijaju u tečne faze, pri čemu je antigene determinante hormona su postali dostupniji primarni antitijela. Međutim, za potrebe istraživanja i izrađeni su vrlo osjetljivi test sistem zasnovan na ELISA.

preciznost

Ovaj stepen bliskosti rezultata mjerenja koncentracije hormona u svoju pravu vrijednost. Preciznost ovisi o osjetljivosti i sistemska greška u metodi: to je veća osjetljivost i manja greška, to je veća preciznost. Preciznost imunohemijski test sistema je ocijenjen od strane mjerenja koncentracije hormona u standardnim uzorcima.

reproducibilnost

Ova sposobnost imunohemijski test metoda daje slične rezultate moguće s ponovljenim mjerenjima hormona koncentracije u istom uzorku pod različitim uvjetima (u različitim vremenima, u različitim laboratorijima). Za procjenu reproducibilnost je korišten kao standard uzorcima iz pacijenata i uzoraka. Da bi se postigla visoka reproducibilnost, laboratorija mora biti tečno u radu sa ovom metodom test sistema i mjerenja pod standardnim uvjetima (na istoj temperaturi, isti trajanja reakcije).

Video: Podizanje Tehnologija - Rad s automatskim biohemijski analizator ChemWell-T

Specifičnost, osjetljivost i reproducibilnost je obavezna su navedene u uputama i podacima za sve komercijalno dostupne imunohemijski test sistema i imunohemijska autoanalyzer. Ipak, svaka laboratorija treba nezavisno procijeniti sve od ovih postavki, posebno reproduktivnost, u stvarnim radnim uvjetima.