Razvoj i korištenje metoda za određivanje serotipa kruži genotipova hepatitisa C virusa.

Hepatitis C virus (TOS) odnosi se na vozbuditelyams izuzetno izražena heterogenost stanovništva. Utvrđeno je da pacijenti sa hroničnim HS povezane sa raznim genotipamivirusa, različito reaguju na virus interferonoterapiyu.Opredeleniegenotipov HS važno u epidemiološkim studijama, jer omogućava prenos dobro dokumentirani patogena.

Svrha ove studije - da proceni vozmozhnostimetoda serotyping za određivanje genotipova HS. Dlyaserotipirovaniya je usvojen od originala metoda, opisannyygruppoy istraživači iz Velike Britanije pod P.Simmonds smjernice (1993,1995). 12 kratkih peptida (18-19 aminokiselina) koji predstavljaju epitope proteina NS4 6 genotipova farmi bili poluchenymetodom čvrste faze sinteze, pročišćavanje preko kromatografije i vysokoeffektivnoyzhidkostnoy koristiti kao osnova imunoanaliza immunosorbentadlya sa sera soderzhaschimiantitela na NS4 protein (anti-NS4) . Prisustvo anti-NS4 podtverzhdalosv ELISA s mješavinom peptida za serotyping ili imunoblottingu (LiaTek HCV, Organon Teknika- Wellcozyme HCV Western blot, Murex).

Specifičnost utvrđivanja genotipova teške razarabotannymvariantom serotyping studirao usporedbom rezultata "slijepi" test panel od 154 seruma protiv NS4-pozitivnyhobraztsov sa poznatim genotipova (osim 1 uzorak) definiran koristeći postupak opisan RFLP P.Pohjanpeltoet al. (1996) na Katedri za virusologiju, Sveučilišta u Helsinkiju.

Za proučavanje širenja variantovvirusa GS u nekim oblastima Rusije (St. Petersburg, Nižnji Novgorod, Ufa, Belgorod) i susjednih zemalja (Rusija, Kazahstan, Gruzija) po serotip testirani su anti-NS4-pozitivnyesyvorotki dobili od 474 ljudi, uključujući 157 davalaca krvi , 237 pacijenata sa hepatitisom C, a 80 osoba u riziku (vnutrivennyenarkomany, obolelih od raka, pacijenti hronicheskogogemodializa centrima, bolnicama i drugim tuberkuloze.).

Rezultati "slijepa" testiranje 154 syvorotoks poznatih genotipova virusa hepatitisa C od RFLP prikazane tabele №1. U principu serotipirovano 148 uzoraka (96,1%). Polnoesovpadenie sumpor- i genotipova primijećeni u 130 od 148 seruma (87,8%). Za pojedinačne genotipova ta brojka bila razlichnym.Naibolshaya frekvencija odgovarajući rezultati pratiti zbog HCV-1 - (92,5%) sa indeksom rasipanja od 87,1% za seruma subtipa1v do 100% za seruma s mješovitim podtipa 1a + 1v- za HCV 3- 94,3% (sve u serumu tretiranih nekretnine 3a). Najmanji rezultati protsentsovpadeniya poštovati prilikom testiranja seruma na RFLP pripadaju HCV genotip 2 (80%). Kada 5 serotipirovaniibylo otkrivena sera koja bi se mogla pripisati genotipuHCV-4. Međutim, kada se uporede rezultati sa sovpadenieotmecheno RFLP podataka samo 2 uzorka (40%).

Rezultati detekcije visoka korelacija genotipovvirusa GS je dobio dva potpuno različita načina za proučavanje pozvolilaispolzovat serotip kruži GS variantovvirusa u odvojenim teritorijama. Rezultati ovog dijela issledovaniysummirovany u tabeli №2. U principu, sve je studirao territoriyahvyyavlena cirkulaciju 3 genotipova HS u jednom sluchayahv četiri regije definirane HCV-4 genotip. Najčešće opredelyalsyagenotip HCV-1 (od 47,1% u serumu od Gruzije do 74.4% - iz Bjelorusije) .Vtoroe mjesto plasman na stopa detekcije svih teritorija okupirana prakticheskina HCV genotip 3 (15,5% u serumu od Belorussiido 34,0% - Nižnji Novgorod). Mnogo manje studirao syvorotkisoderzhali tip-specifičnih anti-NS4 HCV-2. Maksimalna chastotavyyavleniya ovaj genotip je instaliran u serumu Belarus (12,7%), Kazahstan (13,7%), a minimalna - u serumu iz Sankt Peterburga (3,8%). U 35 seruma iz svih krajeva studirao, sa serotyping je ustanovljeno prisustvo anti-NS4 različitih genotipova (genotipova mješoviti). Najveći udio seruma iz uzoraka smeshannymigenotipami je u oba opredelyalisHCV-1 i HCV-3 (26 od 35 - 74,3%), odnosno najčešće vstrechayuschiesyagenotipy. Ostale varijante kombinacije upoznao znachitelnorezhe - HCV-1 + HCV-2 (8,6%), HCV-2 + HCV-3 (11,4%). HCV-1 + HCV-4 u kombinaciji otkrila dva seruma iz Gruzije (5,7%).

Materijali ove studije svidetelstvuyuto da je upotreba sintetičkih peptida, sootvetstvuyuschihantigennym determinante ne-strukturnih proteina NS4, u kachestveosnovnogo komponenta imunosorbentnim ELISA omogućuje uspeshnoopredelyat genotipova virusa u serumu zaraženih farmi etimvozbuditelem ljudi i prati cirkulaciju genovariantovvozbuditelya regijama.

Kako bi se utvrdilo genotipova su teški ispolzovanmetod PCR-RFLP tipa specifičnih ograničenja fermentamiBst U1 i Bst N1 i naknadne analize ograničenja proizvoda uz pomoć horizontalne elektroforeze u 3% agaroznom gelu (ThiersV. Et al., 1997). Ova metoda je testirana serumu bolesnika s kroničnim krovi15 GS primanje interferona. RNKvirusa GS otkrivena u 14 uzoraka, dok je u 6 slučajeva (42,9%) s subgenotip 3a, 3 (21,4%) - 1 gentip (2- subgenotip1v 1 - subgenotip 1a). GS RNK virus, izolovan od 4 do obraztsovotnosilas rijetko otkriti patogena genotipova - 4/5. Poslednienahodki potrebno dodatno ispitivanje.

Tabela 1. SOPOSTAVLENIE PEZULTATOV OPPEDELENIYAGENOTIPOV VIPUSA GEPATITA Sa METODAMI RFLP i SEPOTIPIPOVANIYA

PPIMECHANIE: * - ne tipipovalos ** - abs.chislo / postotak;

Tabela 2. CHASTOTA OTKRIVANJE PAZLICHNYH GENOTIPOVVIPUSA GEPATITA metodama SEPOTIPIPOVANIYA HA OTDELNYHTEPPITOPIYAH Possii I SOPPEDELNYH STPANAH

PPIMECHANIE: * - abs.chislo syvopotok sa dannym genotip /% (100 nA sa syvopotok ukazannoy teppitopii)

reference:

1. 1.Pohjanpelto P., Lappalainen M., Widell A. i al.// Clin.Diagn.Virol. 1996. godine. -Vol.7. -P. 7-16
2. 2.Simmonds P., Holmes E.C., Cha T.A. et al.// J.Gen.Virol.-1993.-Vol.74.-P. 2391 -2399