Fiziologije mikroorganizama: kulture svojstva bakterija, izolaciju čistih kultura mikroorganizama

Kulturnih dobara bakterija

Kulturi (ili makromorfoloških) svojstva uključuju karakteristike mikroorganizama na čvrstim i tečnim hranljivim podlogama. Na površini od čvrstog hranjivoj podlozi, u zavisnosti od usjeva, mikroorganizama može rasti kao kolonije, moždani udar ili kontinuirano travnjak.

Kolonija pod nazivom izolovanom klaster ćelija jedne vrste, izrastao iz jedne ćelije (klon). Ovisno o tome gdje se mikroorganizam raste (na površini čvrstog hranjivoj podlozi ili u deblji) razlikuju površine, dubina i dno kolonija.

Kolonije uzgaja na površini medija, su različiti: oni su specifični, a njihova studija se koristi za određivanje specifične pribor kulture u okviru studije.

U opisivanju kolonije uzeti u obzir sljedeće značajke:
1) Colony oblik - krug, amoeboid, rizoidnaya, ispravna, itd..

2) veličina (promjer) kolonije - vrlo mala (točka) (0,1-0,5 mm), mala (0,5-3 mm), srednje veličine (3-5 mm) i velika (više od 5 mm u promjeru );

3) Colony površina - je glatka, gruba, oduzet, naboran, sa koncentričnim krugovima ili radijalno izbrazdana;

4) Kolonije profil - ravan, konveksan, stožasti, crateriform itd..

5) transparentnost - dosadno, mat, sjajna, transparentan, puderaste;

6) Boja kolonija (pigment) - bezbojna ili pigmentirana (bijela, žuta, zlatna, crvena, crna), naglašavaju izbor pigmenta u srednjem sa svojim obojenosti;

7) kolonija ivica - glatke, valovite, nazubljenim, resama, itd..

8) kolonija struktura - homogena, fino ili krupnozrnasti struychataya- ivica i koloniju struktura se određuje pomoću lupe ili mikroskopa pri niskim uvećanje stavljanjem Petri jelo sa sjetvu na bini mikroskopom dole poklopac;

9) utvrđuje dosljednost kolonii- dodiruje petlje: kolonija može biti gusta, meka, urasta u agar, nadražaj (for petlja proteže), krto (lako razbijena u kontaktu sa petlji).

Duboke kolonije često liče na više ili manje spljoštene lenticels (oblik ovala sa šiljastim krajevima), ponekad grumenje od vune sa končan dodataka na medij kulture. Formiranje duboko kolonija često u pratnji rupture guste medij, ako mikroorganizmi izolirani plinom.

Dno kolonije obično imaju oblik tankih transparentnih filmova, puzi po dnu.

Karakteristike kolonije mogu varirati sa godinama, oni ovise o sastavu medija i temperature kulture.

Rast mikroorganizama u tečnost medijima u obzir, koristeći četiri-sedam dana kulture uzgaja u stacionarnim uslovima.

U tečnom medijima tokom rasta mikroorganizama se posmatra mutnoće medija, formiranje filma ili ostatke.

Kada je odrastao na polu (0,5-0,7% agara) hranjivoj podlozi mobilne mikroba izazvati naglašenu izmaglicu, još uvijek formiraju rastu samo u toku sadnje kreten u srijedu.

Često rast mikroba je praćena mirisom pigmentacije srednje dioksida. Karakteristika miris nekim kulturama bakterijskih vrsta u vezi sa formiranjem različitih estera (uksusnoetilovogo, uksusnoamilovogo i dr.), Indol, merkaptana, sumporovodik, skatol, amonijak, butanskom kiseline.

Sposobnost stvaranja pigmenata je svojstven mnogim vrstama mikroorganizama. Kemijski priroda pigmenata raznovrsne: karotenoida, antocijana, melanina. Ako pigment se ne rastvara u vodi, obojen kulture nalet- samo ako je vodi, obojeno i hranljive podloge. Smatra se da su pigmenti štite bakterije od razornog djelovanja sunčevih zraka, tako da je zrak toliko pigmentirane bakterije, pored toga, pigmenti su uključeni u metabolizam ovih mikroorganizama.

U prirodi, postoje tzv fluorescentnu kulture bakterija koji svijetle u mraku zelenkasto-plavkasto ili žućkasto svjetlo. Takve bakterije se nalaze uglavnom u rijeci ili morskom vodom. Za svjetlećim bakterijama - photobacteria -otnosyatsya aerobne bakterije (Vibrio, koka, šipke).

Izolacija čistih kultura mikroorganizama

Čista kultura se zove kulture koja sadrži mikroorganizam vrste. Izolacija čistih kultura bakterija -Required korak bakterioloških istraživanja u laboratoriju, da studira razne mikrobiološke kontaminacije životne sredine, kao i općenito za bilo koji rad sa mikroorganizmima.

Ispitnog materijala (voda, tlo, zrak, hranu i druge predmete) obično sadrži klice udruženja.

Izolacija čiste kulture nam omogućava da studiraju morfoloških, kulturnih, biokemijske, antigeni i ostale funkcije, u skladu sa ukupnost koji određuje vrste i tipove članstva patogena, tj. E. Proizvedeno njegovu identifikaciju.

Za izolaciju čistih kultura mikroorganizama koriste tehnike koje se mogu podijeliti u nekoliko grupa:
1. Način Pasteur - serijski razvodnjavanje ispitnog materijala u tečnom hranjivu podlogu do koncentracije jednu ćeliju u volumenu (istorijski značaj).

2. Metod Koch ( "ožičenja ploča") - serijski razvodnjavanje ispitnog materijala u rastopljenom agar (temperatura 48-50 C), zatim popunjavanjem u Petri posudu u kojoj agar očvrsne. Sjetve marke, po pravilu, tri ili četiri prošle razvodnjavanje gdje bakterija postaje oskudna u budućnosti, uz rast od Petri jela izgledaju izolirani kolonije nastaju iz jedne od originalnih majke ćelije. Od izolovan kolonije u dubini agar su čiste kulture bakterija na svježem ponovno zasejavanje okruženju.

3. Način Shukevich - koristi se za dobijanje čiste kulture Proteus i drugih mikroorganizama koji imaju "puzi" rast. Sadnog ispitnog materijala za proizvodnju kondenzacije vode na dnu koso. Pokretljive bakterije (Proteus) su u stanju da hoda uz nagib kulturu, i dalje oblike i dalje rasti na dnu, na mjestu inokulacije. Kultivacije gornje ivice kulture, moguće je da se dobije čista kultura.

4. Način Drigalski - naširoko koristi u bakteriološki praksi test materijal razrijeđen u epruveti sa sterilnim slane ili čorbu. Jedna kap Prvi materijal je uveden u čašu sa sterilnim staklenim špatulom i prostire se na površini medija. Zatim, isti spatule (ne gori kroz njega u plamenik plamen) napraviti istu rod u drugom i trećem ploča.

Sa svakim inokulacije bakterija na špatulom je sve manje i manje, a stavlja na treće kup, bakterije će se distribuirati preko površine kulture srednje odvojeno jedni od drugih. Nakon 1-7 dana u inkubatoru skladu čaše (ovisno o stopi rasta mikroorganizama) u trećem kup daje svakom bakterija ćeliju klon izolirani kolonije formiranje koji potkulturom na agar kosim kako bi se akumuliraju čista kultura.

5. Način Weinberg. Posebno poteškoće u raspodjeli čistih kultura Obavezna anaeroba. Ako kontakt s molekularnim kisikom ne izaziva trenutnu smrt ćelija, useva proizvedeni metodom Drygalski, ali onda odmah staviti u šolju anaerobnih. Međutim, većina uzgoj metoda. Njegova suština je u tome da je razvodnjavanje materijala vrši se u rastopljeno i hladi na 45-50 ° agarom.

Napraviti serijski slabljenju 6-10, zatim medij u cijevi se brzo hladi i sipa površinski sloj od mješavine parafina i vazelin nafte kako bi se spriječilo prodiranje zraka u unutrašnjosti hranljive podloge. Ponekad je kultura medij nakon sjetve i miješanje je prebačen u sterilnu epruvetu ili kapilarni Burri Pasteur pipete, čiji krajevi su zatvoreni. Ako uspješan uzgoj u cijevi, cijevi Burri, Pasteur pipeta anaerobi rastu izolovane kolonije. Koristite podloge, pojasnio da su izolovane kolonije su bile jasno vidljive.

Da biste izdvojili izolovane kolonije anaerobi cijev zagrijava malo je rotirajući u plamenu, s agar, uz zidove, a sadržaj tube topi kao agar kolona staje u sterilnu petri jelo. Kolona agara je rez sterilnim pincetom i ukloniti koloniju petlje. Izvađen kolonije su postavljeni u tečnom mediju, pogoduju razvoju mikroorganizama dodijeljen. Agara vazduh iz tube Burri, prolazeći gas kroz pamučni čep.

6. Metoda Hungate. Kada žele da se izolovane kolonije bakterija u posebno visoku osjetljivost na kisik (stroga aerobi) metodom rotirajućeg Hungate cijevi. Da bi se to rastaljenog agarom inokulirane bakterija na konstantne struje kroz cijev inertnog plina oslobođen nečistoća kisika. Cijev je zatim zatvorio sa gumenim septum i postavljen horizontalno u spona, rotirajući probirku- danas sa ravnomjerno raspoređena duž zidova cijevi i tanak sloj stvrdne. Nanošenjem tankog sloja cijev ispunjena mješavinu gasa omogućava da dobije izolovane kolonije jasno vidljive golim okom.

7. Izolacija pojedinačne ćelije koristeći mikromanipulator. Mikromanipulator - uređaj koji omogućuje mikropipeta ili poseban mikropetli uklanjanje jedne ćelije iz cisterne. Ova operacija se upravlja pod mikroskopom. Na sceni vlažnoj komori mikroskop postavljen u kojem se lijek stavlja "visi kap". Nosioci operativni stativi fiksni mikropipeta (mikropetli), kretanje koja je u vidnom polju mikroskopa napravljena sa mikrona preciznost zahvaljujući sistemu vijaka i poluge. Istraživač gleda u mikroskop, pojedinačne ćelije mikropipete preuzima i prenosi ih u epruvete koje sadrže sterilne tečnom mediju dobiti klon ćelija.

LV Timošenko, MV Chubik

Udio u društvenim mrežama:

Povezani