Endokrinologija proteolitičke enzime učinak na metaboličku aktivnost moždanih ćelija i neutrofilni leukociti albino štakora

Poznato je da proteolitičke enzime (tripsina, himotripsin, i drugi) u nekim slučajevima imaju izraženu protivovospalitelnoedeystvie. U tom smislu, relativno proteaze enzima shirokoispolzuyutsya za liječenje raznih upalnih bolesti grupe: bronho-plućni, ginekološki, stomatološki, opuholevyhprotsessov (2,7,14), kao i u prevenciji upale na operaciji (6). mehanizmi međuvremenu profilaktičke i terapijske deystviyaproteoliticheskih fermentv upalnih procesa ostayutsyanedostatochno studirao. Najpotpunije lit i uloga književnosti argumentirovanav nekroze i fibrinolitik (trombolitiåkom) efekat proteaza u antiupalno (5,6). Međutim, u literaturi je malo dokaza direktan uticaj proteaza na metabolicheskuyuaktivnost ćelija.

Rad je imao za cilj eksperimentalne issledovanievliyaniya tripsin i kalikrein na aerobnogookisleniya aktivnost enzima u nervnim ćelijama i makrofaga igraju vodeći Rolv prevencija upale (gematoentsefalicheskiybarer).

Materijali i metode.

Eksperimenti su izvedeni na 61 bijelac štakora stanovništva Vistarmassoy 200-250 g Postignuto 10 serija eksperimenata: 6 serija - kontrola koji je studirao dehidrogenaze u neutrofila leykotsitahi sistemu "neuron-neuroglija" mozgaintaktnyh korteksa životinja intraperitonealne injekcije od 0,85% natrij rastvorahloristogo inaktivirano tripsin i kalikrein (39krys) - Serija 4 - eksperimentalni u kojem degidrogenazneyrotsitov aktivnost proučavati intraperitonealne injekcije aktivnih tripsina i kalikrein, kao i aktivnosti Dehidrogenaze i sadržaj glikogena u neytrofilnyhleykotsitah pacova intraperitonealne injekcije testa aktivnyhfermentov (24 životinja). Test droga je upravljalo iz rascheta50 mikrograma po 100 grama težine životinja. Studija metaboličkih nervnyhkletok korteksa neutrofilni leukociti osuschestvlyalispustya štakora 6 sati nakon intraperitonealne administracije eksperimenata testa preparatov.Rezultaty su prikazani u tabelama N1 i N2.

Kada histohemijska studija objekta izucheniyasluzhil sekcija mozgu pacova, uzeti u peredneytsentralnoy gyrusu lijevo. Za histohemijska analize su pripremljeni kriostatnyesrezy 15 mikrona debljine na -20^OC u mikrotome- kriostateMK-25 od uobičajenih metoda [9]. Cerebralni korteks ćelije mozgakrys laktat dehidrogenaze aktivnost je otkrivena, postupak glitserofosfatdegidrogenazypo Hess, Scarpelli, Pierce [9] i suktsinatdegidrogenazypo Nahlasa postupak [8]. Aktivnost Dehidrogenaze suditi pokontsentratsii formazan granule u rubrikama objekata. Kontrolspetsifichnosti degidrogenazprovodili histohemijska detekciju aktivnosti na kriostat dijelovima mozga tkivo koje inkubirovaliv radi rješenja u odsustvu posebnih substratovokisleniya njemu. Accounting histohemijska reakcija pomoću dehidrogenaze osuschestvlyalis cytophotometry na talasnoj dužini od 512 nm, zonda0,1 cm promjera, leća 40 [1]. Procjena čisto kemijske reakcije otsenivaliv jedinice apsorbancije. Prilikom određivanja aktivnosti neutrofilni granulocita degidrogenazv krvi bijele štakora istražiti aktivnostSDG [15], LDH i za metodu TPD Hess et al. [8] modifikacija predloženih Borisova MA et al. [3,4]. Citokemijske vyyavlenieglikogena u neutrofilni leukociti je izvršena metodom Hotchkiss-Shabadash [11,13]. Konačna procjena citokemijska reakcija osuschestvlyalipo princip Kaplow L. [14]. Polimorfonuklearni leukociti u zavisimostiot stepen aktivnosti enzima je klasificirano:
1 stepen - u citoplazmi pojedinačnih peleta sadrži formazana.Aktivnost enzima zanemarljiv (slika 1a).
2 stepen - formazan granule zauzimaju manje od pola tsitoplazmykletok. Ova skupina uključuje ćelije koje sadrže male (prašina) uključuje ili vrlo blijedo obojene difuzni mase (1B).
3 stepen - izrazio Uključene leukocita reakcijom proizvode, koje zauzimaju više od polovine citoplazmi neutrofili (Fig.1c).
4 stepen - izrazio ćelije Uključene reakcije zauzimaju cijelu citoplazmi se neutrofila leukocita. Aktivnostfermenta visoka (ris.1g). Rezultati statistike obrabatyvalimetodami varijacija istraživanja.

Rezultati i diskusija.

Intraperitonealni injekcija pacova izazvala porast tripsina ilikallikreina u neurocytes i ćelija neyrogliibolshih hemisfere aktivnost enzima aerobnogookisleniya - LDH 27,2% (p < 0,001), на 18,2% (р < 0,002)соответственно. Активность ЛДГ в изучаемых клетках больших полушарийголовного мозга под действием трипсина и калликреина снизиласьна 27,8% (p < 0,025) и на 16,3 (р < 0,001) соответственно.Активность ГФД в нейроцитах и клетках нейроглии больших полушарийголовного мозга снизилась на 26,0% (р < 0,01) только под действиемтрипсина. Введение калликреина также вызвало уменьшение данногоцитохимического показателя на 5,3% (р < 0,05).

Rezultati istraživanja prikazani su u tabeli obobschenyi. N1.
Efekt tripsina i kalikrein na dehidrogenaze, neuroglija sistemeneyrotsit cerebralni korteks štakora in vivo (M +/- m).

Napomena: brojnik - Aktivnost degidrogenazv uslovne uobičajene jedinice u nazivniku - promjene indeksa u odnosu na kontrolnu protsentahpo. Za niz eksperimenata N3,4 - kontrola yavlyaetsyaseriya N2. Serija N5- serije N3. Za seriju N6 - N4 serije. (*) - P < 0,05- (**) - р < 0,025- (***) - р < 0,01- (****)- р < 0,002- (*****) - р < 0,01.

Podataka Poređenje histohemijskim issledovaniyameta paraboličnim aktivnost moždanih ćelija i krvi belyhkrys proučavao djelovanje proteaza identifikovala iste pokazatelje napravlennostizuchaemyh. Parenteralne administracije tripsinai kalikrein životinja u dozi od 50 mg na 100 g tjelesne težine izazvala suschestvennyysdvig sistema metabolizam i neurona-neuroglija i kore golovnogomozga i neutrofili prema povećana aerobna oksidacija vosstanovitelnyhprotsessov, kao što je jasno svjedoči i porast aktivnostiSDG, ključni enzim oksidativnog fosforilacija. Uchityvayapryamoe kininogenaznoe akciju krvi tripsin i kalikrein [12], možemo pretpostaviti da smo identificirali citokemijska izmeneniyav ćelije kore hemisfera pacova obuslovlenybiologicheskim djelovanja kinins, što je verovatno pronikayutcherez krvno-moždanu barijeru i stimulirati u neuronskim procesima tkaniaerobnye redox.

Smanjena aktivnost LDH, ključni enzim aerobnogookislitelnogo enzima u ćelijama mozga i krvi belyhkrys djelovanjem tripsina ukazuje na to da ova fermentpri parenteralne administracije inhibira glikolize u ćelijama sa specifičnosti razlichnoyfunktsionalnoy.

Poznato je da u usporedbi sa većinom drugihkletok tijela u svim leukocitima glikoliticki prevraschenieuglevodov prevladava nad oksidativnog fosforilacija. Udelnyyves glikolize je više od 60% u ukupnoj energeticheskihprotsessov [10].

Tabela 2.
Promjene dehidrogenaze aktivnost i sadržaj glikogena u neytrofilnyhleykotsitah bijele štakora pod djelovanjem tripsina i kalikrein (M +/- m) - (u jedinicama aktivnosti Kaplow)

Napomena: u svakoj seriji issledovaniyi koristi u kontroli 6 životinja. Značajnost razlika: p < 0,001.

1. Parenteralno davanje niskih doza tripsina horoshoizuchennymi uz terapeutska svojstva, inhibira anaerobne energeticheskiyobmen neutrofili inhibiraju leukocita proces migracije ochagvospaleniya i na taj način sprečava širenje vospalitelnogoprotsessa.
2. Utjecaj male doze tripsina povećava antitripticheskuyu aktivnostgomogenata hemisfera pacova i ima vyrazhennyylechebny antiinflamatorno.
3. Male doze kalikrein, kao što su niske doze tripsina snizhayutaktivnost LDH i TPD u neutrofila leukocita i mozak homogenata stimuliruyutantitripsinoliticheskuyu aktivnost mozgakrys koji omogućava kalikrein u malim dozama, kao i tripsina, koristi kao antiinflamatorni agent.

reference

1. Agroskin LS Papayan GV Cytophotometry oprema i metodyanaliza svjetlosti apsorpcija ćelija. - Lenjingrad. Nauke, 1979.- 259 str.
2. Baumhakl U. S. Fodemar, Kreychova H. enzim ostryhi hroničnih upalnih procesa u knjizi: Sistemski enzim terapija: istraživanje i kliničkoj praksi. Uređenje K.Nouza, ZA. Masinovsky, R. Nouza. - München. - Prag. - 1994. - S. 27-30.
3. Borisova MA, Ovcharenko NI, banje AS Neki supravitalnyesposoby citokemijska određivanje aktivnosti sukcinat dehidrogenaze laktatdegidrogenazyi krvnih zrnaca // Lab. poslovanja. - 1975.- N 12. - S. 723-725.
4. Borisova MA, Ovcharenko NI Shpak SI, et al. Supravitalnyesposoby citokemijska određivanje aktivnost alfa-glitserofosfatdegidrogenazyi glukoza-6-fosfat dehidrogenaze u leukocitima perifericheskoykrovi // Lab. poslovanja. - 1983. - N 9. - str 8-10.
5. VF Veselov, VA Protsenko Efekt proteolitičkih enzima uux inhibitora na unos kisika moždanog tkiva štakora i eeantitripticheskuyu aktivnost // Ukr. Biochem. Zh. - 1981. -N 4. - str 106-108.
6. Vuk, M., K. tretman Ransberg enzima. - Moskva: Mir, 1976.- 233 str.
7. Dittmar DF Adnexitis u knjizi: Sistemski enzim terapija: studije-niyai kliničkoj praksi. Uredio K. Nouza, ZA. Masinovsky, P. Nouza. - München. - Prag. - 1994. - S. 35-36.
8. E. Pierce histohemiji Theoretical and Applied. Moskva: Inostr.liter, 1962.- 962 str ..
9. Fedorov NA Normalno hematopoeze i njegove regulacije. - Moskva: Medicine, 1976. - 543 str.
10. Shabadash AL Citološka i citokemijska mehanizama predstavleniyao barijera u ćelijama. Zbornik radova sastanka u knjizi: Histo-gematicheskiebarery. - Moskva: Nauka, 1961. - P. 381-394.
11. Hamberg U. Uticaji na kinin sistem proteolize inplasma // Proc. Roy. Sol. - London, 1969. - V. 173. - P. 393-406 N 1032.-.
12. Hotchkiss R.D. A Microchemical reakcija resalting u staimingof polisaharid struktura u fiksnim yissue pripremama // Arch. Biochem. - 1948. - V.16. - P. 131-141.
13. Kaplow L. A histohemijskih postupak za lokalizovanjem evacuatingleucocyte alkalne phasphatase aktivnost u razmazuje krvi srži // krvi. - 1955. - V.10. - P. 1023-1029.
14. Klashka F. Oralni enzimes - novi pristup cfncer tritment // foruma. - Med. - Verl. - Ges. - 1996. -V.2.- R. 102.
15. Quglino D., Hayhol F. Aceton fiksacija za cytochemicaldemonstration od dehidrogenase u krvi i koštane srži ctlls // Nature.- 1960. -V.1.- P. 85-86.
16. Sokolova A. Behandlung des multiplen myeloms mit enzimen // Wzarba Y., Klein M.-W., Miehlke et al. (Ur.). Sistemischeenzymtherapie. Aktueller stoje i Fortschritte. - MMW MedizinVerlag. - Munchen. - Njemačka. - 1996.