Tehnike

Testiranje pribor i uređaji za prikupljanje tjelesne tekućine (Nechiporenko, 1999)

Algotest kvantificirati biološke aktivnosti hemijskih jedinjenja (Barashkov, Kiristaeva 1977)

Priprema uzoraka za analizu multi-element metodoloških uputstava Ruske Federalne sanitarna inspekcija centar MUK 4.1.1483-03

metoda Formulacija određivanje olova u krvi od strane ICP-MS izotopa razrjeđivanje (Paschal et al., 1995)

Način multielement analize krvi frakcija

Određivanje sulfa jedinjenja (Prebsting i Gavrilova Timofeeva način modifikacija za određivanje aktivnost N-acetiltransferaze) (Pershyn 1971)

Testiranje pribor i uređaji za prikupljanje tjelesne tekućine (Nechiporenko, 1999)

Test kontejnere (tube, bočice), šprice tipa "leptir" sistema (plastične štrcaljke i cijevi).

1. Solvent: mešavina od 1% HNO₃ i 0.001% Triton X-100. Pripremljeni koristeći destiliranu vodu. 10 ml HNO₃ (Reagens razred) je dodan u 500 ml čiste vode u diplomirani bocu od 1 litra. Zatim je dodao 1 ml Triton X-100. Nakon raspada, volumen smjese je prilagođen na 1 litar.

2. Za testiranje plastičnih šprica, kontejnera, kapilara unutar čine predmet i 1 ml otapala se prenosi na test cijevi. U slučaju da rješenje se čuva u kontejneru obrnuti za poklopac ili utikača vreća za 12-14 h. U slučaju ispitivanja metalnih igala su prošli kroz po 1 ml otopine. Onda su svi analiti pojedinačno testirano na sadržaj metala.

3. Svi proračuni su izvedeni na po 1 ml otopine. Ukupnog sadržaja ukupnog metala u svim uređajima ne smije biti veća od 5% prosječne ekvivalent izračunava nivo sadržaj metala u biološkom uzorku.

Algotest kvantificirati biološke aktivnosti hemijskih jedinjenja (Barashkov, Kiristaeva 1977)

U certifikatu dolje opisanih pronalazača № 557098. dobiti u algotest 1977 g. Iako tehnički, ova metoda nije jako komplikovan, potrebno je ispuniti nekoliko uslova, posebno, kako bi se osiguralo prisustvo lyuminostata (Continuous fluorescentnim svjetlom fluorescentnih lampi sa intenzitetom 3700 erg / cm² sec, inkubacije temperatura 29 ± 3 ° C) i imaju iskustva sa algama.

Test mezofilne organizam je soj zelenih algi Chlorella pyrenoidosa 82 iz kolekcije kafića. MSU mikrobiologije. Ona se uzgaja 3 dana uz stalno svjetlo, što je sijalice sa intenzitetom od 10. januara⁵ erga / cm² e na 28 ° C. pun Tamiya okruženje urea i dodao mikroelemenata u Arnon-4 rješenje.

Prije nego ćelije eksperiment alge (sredina-log fazi rasta) je odvojen od srednje centrifugiranjem (3 tys.ob / min, 1200g, 5 min), oprati 0,01% natrij NaCl i razrijeđen 5 puta Pretpostavka-1 srednji sa pH od oko 7,0, potpuno lišen organskih aditiva.

Optimalne koncentracije algi ćelija za maksimalnu osjetljivost (10. maj⁵ - 10. april⁶/ Ml) odgovara 15-40 jedinica "silika-gel indeks" (SP), koji je jednak masi suspenzije u CSC fumed silika mg / ml sa istim optičke gustine na 578 nm kao alge suspenzija.

Prilikom vrednovanja toksičnosti supstanci ili njihove smjese su moguće opcije koje se odnose na topljivost test supstanci. supstanca rastvorljiva u vodi se uvodi u cisterne u koncentracijama koje se razlikuju po jedan kako bi, na primjer, 10, 1, 0,1, 0,01 mg / ml. Netopive u vodi tvari u sverhrastvoritele upravom, na primjer, dimethylsulfoxide (DMSO) ili dimetilformamid (DMF). koncentracija Sverhrastvoriteley ne smije biti veća od 3% zbog svoje inherentne toksičnosti.

Kuhana eksperimentalne i kontrolne sa identičnim početni cisterne sa SP₍₁ sipa u 20-25 ml široka usta boce ili Erlenmey-EPA (50-100 ml) ili u standardnim epruvetama u stalci transparentan, zatvoren pamuka i inkubiraju na 85-95 lyuminostate sat. Tehnički pogodan i zadovoljavajući za statističku obradu da ponovi svaku opciju 5 puta.

Nakon inkubacije boce (ili cijevi) su bili smješteni u kupku ultrazvučna i ultrazvučno ozračene za 10-15 sekundi sa 100 vati da se dobije homogena suspenzija. Oni definišu JV iskustvo i kontrole (JV_K) Do apsorpcije na 578 nm (ili broj ćelija). Proračuna koje je izvršio po formuli:

gdje% T₂ - postotak promjene kulture dupliranja vremena. Pozitivan rezultat ukazuje na prisustvo zaostajanje u rastu i toksično dejstvo, negativan - poticajan.

Kritične koncentracije (C_CR) Su grafički. Osi ordinata predstavlja izračunate vrijednosti% T₂ (Iznad 0 - pozitivan, niže - negativan), a apscisa - koncentracija ispitivane supstance na logaritamskoj skali. Mjesto križanja linije segmenta između tačaka sa većim i manjim vrijednostima% T₂ 5% razini, paralelno sa osi apscisa daje vrijednost K_CR- 5% je prihvaćena kao kritičan nivo s obzirom na to da neke supstance ne uzrokuju jasan stimulativne efekt, i smanjiti ispod 5 povećava relativna greška u određivanju.

A vrlo povoljno rezultat izraz je, pored K_CR, proračun uzorak toksičnost u odnosu na toksičnost bakra sulfat u "Tox" (T_sa), Identificirani u istoj seriji eksperimenata: T_sa = K^sa_CR/ K_CR. Izbor kao model toksičnost standard CuSO₄ s obzirom na to da taj materijal zadovoljava sljedeća dva uslova: 1) je najčešće kao model fluora i 2) daje jasnu vrijednost K^sa_CR najmanje razlike između otrovnih i stimulativne koncentracijama.

POTE: Od pojave selektivna toksičnost, slijedi da je univerzalni test organizmi ne postoje. Poznati testove kao što su test dafnije, na osnovu određivanja LD₅₀, To praktično omogućuje da postavite kritična koncentracija ispitivane supstance, i.e. viši organizam koji vitalna aktivnost inhibiran. Osim toga, test organizam za eksperimente bi trebao biti u standardnom fiziološko stanje u bilo koje doba godine. Ovaj zahtjev je najpogodniji za single-cell zelenih algi.

Korištenje mezofilne sojeva Chlorella omogućava da se poveća osjetljivost bioprocene u odnosu na bilo koji drugi za više od dva reda veličine, na vrlo jednostavan način. Pre-soj uzgaja u potpunoj srednje ureom, to je mezotrofne. Ćelije su zatim oprati bez srednje i preselio se u siromašni autotrofni uslovima, koji je izložen dvostrukom fiziološke šok.

Potrebu uvođenja internog standarda toksičnost proizlazi iz nemogućnosti da sprovede eksperimenata u različitim godišnjim dobima u istim uvjetima. K^sa_CR To varira od eksperimenta da eksperimentišu, ali u većini slučajeva je oko 3 mg CuSO₄/ L.

Priprema uzoraka za analizu multi-element metodoloških uputstava Ruske Federalne sanitarna inspekcija centar MUK 4.1.1483-03

Za pripremu uzorka pomoću ICP-MS da se koristi jela fluoroplastic temeljito oprati u ultrazvučnoj kadi razrijeđen 1: 1 HNO₃ i isprati tri puta dejonizovanom H₂O.

Izbor, skladištenje i priprema uzoraka

kosa završnica u potiljak u iznosu od >0,1 g, je tretirana sa acetonom za 10-15 minuta, pere 3 puta sa dejonizovanom H₂oh.

nokti cut s obje ruke, i tretirati na isti način. Oba objekta su pohranjeni na papiru koverte.

krv od ulnarnog vene u iznosu >1 ml čuva u frižideru 3-5 dana ili u zamrzivač (18 ° C) ili liofilizirane. Za dugoročno čuvanje uzorci su smješteni u jednokratnu polipropilena cijevi sa teškim poklopcima.

Isto tako, tretiraju krv u pripremi lijekova pakuju crvenih krvnih zrnaca, plazma i sera, i uzorak mlijeka, sjemena, limfe, pljuvačke.

urin (Jutro ili dnevno) u iznosu od najmanje 5 ml je stavljen u zatvorenoj plastičnoj posudi u hladnjaku do 3 dana ili smrznuti.

biopsija mišića, kože, epitela, jetra, i dr., odmah nakon pripreme je težio, datum u zatvorenoj plastičnoj jela i čuvati u frižideru za 3-5 dana ili smrznuti.

Uzorci kostiju i zuba je stavljen u zatvorenoj plastičnoj ambalaži iz laboratorija.

pripreme amino kiseline, multivitamine, BAS i sirovina za njihovu proizvodnju dolazi u proizvođača paketu. Minimalna težina od 10 g čvrstih preparata, tečnost - 100ml.

Otvoren razgradnje uzoraka

Kose, noktiju i dr. Čvrstih uzoraka. Jedan dio uzorka stavlja u teflon cilindru je dodan 0,2-1,0 ml koncentrirana HNO₃, zaštitni poklopac laboratorija filma i staviti u termobloka u 0,5-1,0 sata na 115 ° C do potpunog raspada. Rastvorenih Uzorak je kvantitativno prebačen u mjerenje cijev i voda od pranja je prilagođen volumen od 10 ml, a onda - na analizu.

Video: Max OT. tehnike obuke

tekućih uzoraka. Precizno težio uzoraka (0,1-0,5 ml) je stavljen u teflon cilindru, utvrđivanje težine uzorka cijevi mase razlika prije i nakon pripreme uzorka. Je dodan 0,3-1,0 ml koncentrirana HNO₃ i homogenizirani uzorak kao što je opisano gore.

Da biste spriječili taloženje proteina i nadoknadi za velike uzorke viskoznosti dozvoljeno jednostavan razrjeđivanje uzorka sa dejonizovanom vodom slijedi zakiseljavanje s faktorom razrjeđenja od najmanje 1: 100.

mikrovalna raspadanja

Precizno težio uzorak se stavlja u teflon brod, 5 ml HNO₃ i stavi u mikrovalnu pećnicu. Razgradnje vrši proizvođač programa (obično 5 minuta na 200"C) kvantitativno prebačen u epruvetu i volumen prilagođen 10 ml vode. Uzorak 1 ml je prilagođen volumen od 10 ml 0,5% HNO₃ i analizirani.

Dozvoljen je direktan izbor alikvot od raspadnuti volumena uzorka 0,1-0,5 ml. Kako bi se nadoknadio grešaka prije raspadanja razvodnjavanje uzorak uvodi interni standard (U, Rh) Na koncentraciju analita u finalu rješenje je bilo oko 10 g / l. Rješenje unutarnjeg standarda treba dodati i sve jedan i kalibraciju rješenja.

Korekcija Isobar preklapanja, višehidroksilni prekrivače i buke

Smetnje za ispravljanje pogrešaka tehnike otkrivene određivanjem standardni dodatak i mjerenje serijski razrijeđene serije uzoraka.

korekcija izobarsko Preklapanja automatski proizvodi, u skladu sa softverskim paketima instrumenata za ICP-MS. Ista korekcija koeficijenata određuje eksperimentalno.

korekcija višehidroksilni preklapanja zahtijeva pažnju operatora za otklanjanje smetnje. Uređaji sa Reaktionsküvette se uklanja većina polyatomic preklapanja u načelu. Specifične metode za različite oličenje ručno ukloniti smetnje su poznati i prikazani su u odgovarajućim uputstvima na postojeće uređaja.

buke ispravljanjem maksimalno moguće razvodnjavanje i pozadine normalizaciji kiseline. Korištenje interni standard eliminira uzorka greške razrjeđivanje i inkorporirati mnoge matrice efekta na plazma i ion protoka.

Kalibracije instrumenta, mjerenje, analiza mjerenja i obavljanje interne operativne kontrole opisano u odgovarajućim uputstvima za instrument. Proizvođači mašina i opreme za obavljanje odgovarajuće obuke za operatere u okviru ugovora za nabavku opreme.

metoda Formulacija određivanje olova u krvi od strane ICP-MS izotopa razrjeđivanje (Paschal et al., 1995)

Precizno težio uzorak krvi dva 0.5 Na dodana oko 100 mg otopine (oko 100 mikrolitara) SRM 983 standardnih sadrže 92.15 u.% ²⁰⁶pb na konačna koncentracija od oko 1 mg pb/ G. U dva alikvote su dodati 2 ml koncentrirane ultračistu HNO₃ i spali ih u mikrovalnoj pećnici u ponderirana PTFE plovila.

Ostaci ohladi, prebačen u 15 ml tuba je i razrijediti do 10 ml vode. Alikvote su analizirani ICP-MS i odrediti odnos ²⁰⁸pb/²⁰⁶pb. koncentracija pb u originalnom uzorku je izračunat po formuli:

gdje [pb] - koncentracija pb u nepoznatom uzorku u ng / g,

K - koeficijent relativne atomske mase prirodnih pb relativne atomske mase pb u uzorku s dodanom ²⁰⁶pb (A_r = 206,063)

c_e - koncentracija pb u uzorku s dodanom ²⁰⁶pb ng / g,

m_sp - težina (g) je dodan rješenje od ²⁰⁶pb,

m_sm - težina (g) originalnog uzorka,

0.0125 - relativni sadržaj ²⁰⁸pb u uzorku s dodanom SRM 983

0.921497 - relativna sadržaj ²⁰⁶pb u isto rješenje,

208/206 (e) - odnos u dodao je rješenje,

A₂₀₆ i A₂₀₈ - Prirodni sadržaj ²⁰⁶pb i ²⁰⁸pb u originalnom uzorku.

Način multielement analize krvi frakcija

za plazma obično u standardne plastične cijevi strukture pripadaju antikoagulans (heparin-Na ili -Li soli, K₂-EDTA Trilon B = 9NC Na citrat, oksalat) Get uzorak krvi. Ćelije treba odvojiti što je prije moguće centrifugiranjem, kao kratkotrajni učinak heparina i antikoagulansa značajno izmijeniti elementarni sastav seruma. Za dugoročno skladištenje uzoraka krvi u frižideru je doći neizbježan proces hemolize, i u zamrzivaču krvnih ćelija su uništeni.

za sera dopustiti uzorak krvi zgrušati ( "Curl"), nakon čega fibrinskog ugruška je odvojena zajedno sa ćelijama. Ako želite da se protein-free filtrirati (BBF), zatim na 1 dio krvi dodao 9 delova 5% TCA (TCA). Protein talog je uklonjen centrifugiranjem (2 th. Okr / min, 10 min). Za određivanje elemenata supernatant je korišten.

0,5 ml krvi ili plazme ili seruma je postavljen u je dodan 4,5 ml 30% mikrovalnu bočicu HNO₃. sadržaj mineralizacije (Npr, u mikrovalnoj pećnici firma Berghof Speedwave ™ MWS-2 Program P₆ proces u 3 koraka (25 min)).

Mineralizacije rješenje je razrijediti s 5% HNO₃ do 10 ml (20 puta razvodnjavanje) i koriste se za određivanje ICP-MS.

primjedba: U slučaju rezultata off-skalu za pojedine elemente analita razrijeđen. Svi razrjeđenja u obzir u konačnom minuta rezultata.

Određivanje sulfa jedinjenja (Prebsting i Gavrilova Timofeeva način modifikacija za određivanje aktivnosti N-acetiltransferaze) (Pershin, 1971)

reagensi:

1) 15% trihlorsirćetnoj kiselina (TCA)

2) 0.5% rastvor NaNO₂

3) zasićeni rastvor CH₃COONa (1 deo soli otopljenih u 2,8 dijelovima H₂O)

4) 0.5% rastvora acetilisani H-kiselina (1,8-aminooksinaftalin-3,6-disulfonske kiselina) (pripremljen na dan eksperimenta)

5) 7-10% rastvor HCl

6) Osnovni standard rješenje

10 mg sulfadimezin norsulfazola ili staviti u bocu zapremine 100 ml i 2,1 ml 0,1 N NaOH da se potpuno raspusti sulfamid. prelivena sa destiliranom H₂O do oznake, i.e. prije koncentracija droga 100 ug u 1 ml otopine. Rešenje je čuva u frižideru.

Kriva kalibracije je izgrađen korištenjem niz rješenja za proučavanje lijekove uzeti za analizu photoelectrocolorimeter (FEC) sa plavim filterom, na primjer, 10-8-6-4-2 ug / ml.

Predmet se daje 1-2 tablete od sulfa droga, a prikupljeni svakodnevno urina. Cijev je ispunjena je dodan 0,2 ml urina 2 ml rastvora №1 + 1 № 5 ml i 6.8 ml destilirane H₂O. Nakon miješanje i filtriranje 1 ml filtrata odgovara 0,02 ml urina.

Analiza slobodnog sulfamid. U epruvetu se sipa 2,5 ml filtrata urina sipa 0,1 ml rastvora № 2, je izazvao i nakon 10 min sipa 1,5 ml rastvora № 3 i ponovo miješati. Odmah, 0,25 ml otopine № 4. Nakon dobrog miješanja pojavi ružičaste obojenosti. Nakon 15 minuta, intenzitet se mjeri na FEC sa plavim filterom.

Radni standardi tretiraju Tate isto. Do kriva kalibracije je izračunata koncentracija slobodnog droga uzimajući u obzir sve rastvori.

Analiza ukupne sulfamid. Po prijemu droga u organizmu subjekta acetilisani N-acetiltransferaze. Ovaj dio može se utvrditi tek nakon hidrolize. U epruvetu se sipa 2,5 ml uzorka i 0,25 ml № 5. Isto tako raditi sa standardnim rješenjima. Epruvetu sa mešavina se stavlja u kipuću vodu za kupanje u trajanju od 30 min. Nakon hlađenja, obim tekućine u epruveti je prilagođen 2,5 ml destilovane H₂O. Dalje raditi s rješenjem prema metodi određivanja slobodnog sulfamid.

Kriva kalibracije izgrađena sa standardnim radnog rastvora nakon hidrolize se izračunava ukupan iznos od droge (besplatno i acetylated) u uzorku. Nakon oduzimanjem količinu slobodne droge dobiti u iznosu od acetylated pripreme %% u odnosu na ukupan.

Medicinski bioneorganika. GK ovca