Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.

Moskva, Savezni centar za sanitarnu inspekciju Ministarstva zdravlja Rusije, 1999UtverzhdayuGlavny gosudarstvennyysanitarny vrachRossiyskoy FederatsiiG.G.ONISchENKO23 Oktobar 1999 godaData uvod u januaru 2000. godine goda4.1 -1. Metodi kontrole. HEMIJSKA FAKTORYOPREDELENIE MASS KONTSENTRATSIIMIKOTOKSINOV u hrani sirovina i PRODUKTAHPITANIYA. Priprema uzorka METODOMTVERDOFAZNOY EKSTRAKTSIIMETODICHESKIE UKAZANIYAMUK 4.1.787-991. Razvijen od strane Federalnog centra Državne sanitarne i epidemiološke MinzdravaRossii (VB Skachkov, IV Bragin, Queen NV) i CJSC"BioKhimMak CT" (Vodeći istraživač Vasiyarov GG, GS starshiynauchny zaposlenik Aleksejev, viši istraživač OsokinD.M., Doktor hemijskih nauka Staroverov SM.). 2. Odobreni i stupiti na snagu šef gosudarstvennymsanitarnym doktor Ruske Federacije od 23. oktobra 1999. godine D.3. Vpervye.1 predstavljen. Svrha i opseg primeneniyaNastoyaschie Metodicheskieukazaniyaustanavlivayutsposobypodgotovki uzoraka hrane sirovina i hrane produktovmetodom čvrstoj fazi ekstrakcije posleduyuschegohromatograficheskogo za mikotoksina analize i studije o sigurnosti su dlyaprovedeniyalaboratornyh pischevoyproduktsii gossanepidsluzhby institucijama Ruske Federacije, kao i dlyapredpriyaty i institucije koje se bave kontrolu kvaliteta iissledovaniya hrane sirovina i prehrambenih proizvoda za usklađenost sa Sanpin 2.3.2.560-96 "Kkachestvu higijenske potrebe i sigurnost hrane sirovina i pischevyhproduktov" i akreditovani u skladu sa utvrđenim poryadke.2. Način pripreme probPodgotovka uzoraka uključuje sljedeće sekcije: - vađenje test objekt pruža ekstrakt poluchenieedinogo sadrži sve mikotoksina normalizirana vdannom predmet Sanpin 2.3.2.560-96-- ekstrakta pripremu uzoraka po čvrstoj fazi ekstrakcije vklyuchayuschayapredvaritelnuyuochistku, kontsentrirovanieiokonchatelnuyu pročišćavanje na koncentracijom patrone Diapak.3 . Zahtjevi bezopasnostiPri reagensa, otapala i veschestvamineobhodimo u skladu sa sigurnosnim zahtjevima osnovana dlyaraboty toksične, korozivne i zapaljive supstance Pogost 12.1.005-88.4. Uvjeti pripreme probProtsessy obavljanja priprema i obrada uzoraka rješenje koje vnormalnyh uvjetima na temperaturi od 18 - 22grad. C.5. Aflatoksin B1 (AP-B1), zearalenon (ZON), deoksinivalenol (DON) i T-2 toksin (T-2) 5.1. Opreme, materijala, reaktivyTablitsa 1 + ------------------------------------ + ------ --- + --------- + --- + --- + | Opreme, materijala, reagensi | AT-B1 | ZON | DON | 2 || T i rješenja + ---- + ---- + ---- + ---- + | ||| 1 | 2 | 1 | 2 | | ||| var. | Gdje |. Var. | Var. | | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | tip shaker uzoraka | + || AVU-6C TU 64-1-2451-78 ili magnetnih | ||-magnetnoj ili mehanički mikserom | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | analitička vaga s preciznošću od | + || težio 0,01 g +/- | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | tip Mill "ciklon" QC-114 | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | rotirajućeg isparivača (TS-1M2, | + || W ili 25-1173.102-84 dr.) | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | uređaj za vakuum | + || o -0.7 mmHg (Waterjet | || pumpa, vakuum pumpu za ulje, | || Medicinski aspirator) | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | vakuum uređaja za trening | + || uzoraka (vakuum mnogostrukosti), sa prijemnicima | || nadimke suđenje kapaciteta ne manje od | || 10 cu. vidim | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | uređaj za isparavanje uzoraka | + | + | - | - | - | - || tok dušika podno grijanje oko ||||| | || 40 stepeni. C (suhi zrak je poželjno ||||| | || Bath) ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Koncentriranje kertridža Diapak A-3, | + | + | + | + | + | + || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | kompanija || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Koncentriranje tonerom Diapak AU-3, | - | - | - | - | + | + || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | kompanija || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Koncentriranje tonerom Diapak P-3, | + | + | + | + | - | - || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | kompanija || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Koncentriranje tonerom Diapak H, | + | - | + | - | + | + || TU 4215-002-05451931-94, ZAO ||||| | ||"BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Koncentriranje tonerom Diapak C, | - | + | - | + | - | - || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | kompanija || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | medicinske pinceta, 15 cm | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | metalne spatule ili porculana | + || žlicu | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | ravnim dnom boce sa konusnim | + | + | + | + | - | - || čepovi s kapacitetom od 50 kubnih metara. cm ||||| | || GOST 25336 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | ravnim dnom stožasti boce | + || (Erlenmeyer) zagušenja vmestimos- | || Tew 250 ili 300 ccm. cm | || GOST 25336 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | Buchner boca s kapacitetom od 500 kubnih metara. | + || See | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | lijevak Bunsen kapaciteta | + || 200 cu. vidim | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | lijevak razdvajanja kapaciteta | + || 250 cu. pogledajte GOST 25336 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | ostrodonnye boce sa čepovima na | + || GOST 25336 s izmjenjivim konu- | || som 14/23 kapaciteta od 5, 10 | || 25 cu. vidim | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | kruškolikog oblika boce sa čepovima na | + | + | + | + | - | - || GOST 25336 s izmjenjivim konu- ||||| | || som 14/23 kapacitet od 10 i 25 kubičnih metara. ||||| | || vidjeti ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | mjerenje cilindra sa kapacitetom od 25, 50, | + || 100 cu. cm 2 ćelije, prema GOST 1770 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | microsyringe s kapacitetom od 100 kubnih metara. mm | + || (ili pipete diplomirao GOST | || 20292 izvršenje 4 ili 5, 1. klasifikaciju. | || sa preciznost kapaciteta 1 cc) | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | filter papir (gusta, uska || - || - | + | + || koporistaya polako filtriranje ||||| | | | tanak tip sedimenta "plava ||||| | || Feed") ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | nesterilisani medicinske pamuk, | + || x / b | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | acetonitril za tečne hromatografije | + || Graphy, OP-3 OFS TU | || 6-09-14-2167-84, ispraviti | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | aceton, visoke čistoće, u skladu sa TU 6-09-3513-75 | - | + | - | - | - | - || OP-2, ispravljena ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Benzen, reagens razred, prema GOST 5955-75, vyder- | + | + | + | + | - | - || zhanny preko Na SO, ispraviti ||||| | || April 2 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | heptan, heksan, XQ, TU | + | + | + | + | - | - || 6-09-3375-78 ili petrolej, ||||| | || (frakcija 70 - 100), reagens razred, ||||| | Otkloniti || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 2-propanol (izopropil alkohol), | - | - | - | - | + | + || XQ, TU 6-09-402-75, ||||| | Otkloniti || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Octena kiselina glacijalnog, XV, u | + | + | + | + | - | - || GOST 61-75 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | kloroform, medicinske, zadobila | - | - | - | - | + | + || preko CaCl, ispraviti ||||| | || 2 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | metilen klorida (dihlormetan), | + | + | - | - | - | - || dużem CaCl, ||||| | || 2 ||||| | Otkloniti || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Eter dietil, zadobio više | - | + | - | - | - | - || NaOH, ispraviti ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | etil acetata (etil acetata || + || - || - || kiselina), reagens razred, u skladu sa GOST 22300-76, || ||| | || dużem Na CO i rektifitsi- ||||| | || 3. februar ||||| | Rowan || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | natrijev sulfat, bezvodni, reagens razred, od | + | + | + | + | - | - || GOST 4166-76 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | natrijev klorid, reagens razred, prema GOST 4233-77 | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | destilirane vode | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | extractant - 84% acetonitril u vo | + || de, 840 kubnih metara. Pogledajte acetonitril dovo- | || dyatsya na 1 litru vode ili polucha- | || etsya destilacijom vodom vodenim | || ali - acetonitril smjesa (1: 4) | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 33% benzena u acetonitril - mix | + | + | + | + | - | - || 30 cu. Vidjeti benzena i 60 kubnih metara. Pogledajte aceton ||||| | || tonitrila (1: 2) ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 20% acetonitril u benzena - 20 cu. | + | - | - | - | - | - || cm acetonitril razrijediti benzena ||||| | || do 100 kubnih metara. pogledajte ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 2% octene kiseline u benzenu - 2 | - | - | + | - | - | - || cu. pogledajte razblažiti octena kiselina ||||| | || benzena do 100 kubnih metara. pogledajte ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 5% octene kiseline u benzenu - 5 | - | + | - | - | - | - || cu. pogledajte razblažiti octena kiselina ||||| | || benzena do 100 kubnih metara. pogledajte ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 10% etil acetata u benzena - 10 cu. | - | + | - | + | - | - || cm acetat razblažiti benzena u ||||| | || 100 cu. pogledajte ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 25% heksana u vazduhu - 25 cu. vidim | - | + | - | - | - | - || heksan razrijeđen s dietil eter ||||| | || do 100 kubnih metara. pogledajte ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 10% acetona u dihlorometanu - 10 cu. | - | + | - | - | - | - || cm aceton razrijediti s dihlormetan ||||| | || do 100 kubnih metara. pogledajte ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 20% acetona u dihlorometanu - 20 cu. | - | - | - | - | + | - || cm aceton razrijediti s dihlormetan ||||| | || do 100 kubnih metara. pogledajte ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + 5.2. Način pripreme probOpredelyaemye mikotoksina oporavio extractant iz uzorka mase prisootnoshenii uzorka - obim extractant od 1: 5. Kada opredeleniiaflatoksina B1 i zearalenona je pročišćena vodeni ekstrakt na -atsetonitrilnogo glava Diapak A-3 na kasetu kontsentriruyutmikotoksiny Diapak P-3, sušeno isparavanjem preostale vode i redissolution iposle vrši konačnu ochistkuna glava Diapak H (Diapak C - u slučaju kukuruza i proizvoda iznee ). Razlomak eluiranjem dve frakcije se dobijaju, soderzhaschieaflatoksin B1 i zearalenon, spreman za hromatografske određivanje deoksinivalenol analizu.Pri i T-2 toksin provodyatpredvaritelnuyu čišćenje vode - acetonitril ekstrakt napatrone Diapak AU-3 i koncentriran isparavanjem do isušivanja. Poslepererastvoreniya konačna pročišćavanje se vrši na DiapakN kertridža. Razlomak eluiranjem se dobijaju dve frakcije, soderzhaschiedezoksinivalenol i T-2 toksin, spreman da hromatograficheskomuanalizu.Dlya validaciju stepen pripreme uzorka iutochneniya vađenje mikotoksina analizirati probymetodom standard aditiva na originalni izvod. Osnovnyeharakteristiki priprema uzorka čvrste ekstraktsiiprivedeny u tabeli. 2. Tabela 2OSNOVNYE priprema KARAKTERISTIKE uzorka + ---------------- + --------------- + --------- - + ------------------- + | Mikotoksina | Time | Degree | relativna ||| probopod- | vađenje, | prosječna kvadratiche- ||| kuhanje min. | % | Skoe devijacija,% | + ---------------- + --------------- + --------- - + ------------------- + | aflatoksin B1 | 120 | 75 | 20 | + ---------------- + --------------- + ----------- + - ----------------- + | Zearalenone | 120 | 70 | 20 | + ---------------- + --------------- + ----------- + - ----------------- + | Deoksinivalenol | 90 | 85 | 10 | + ---------------- + --------------- + ----------- + - ----------------- + | T-2 toksin | 90 | 85 | 10 | + ---------------- + --------------- + ----------- + - ----------------- + za postizanje potrebnog stepena ekstrakcije tochnovypolnyat kvalifikacione uslove organskim otapalima, i ihpodgotovke priprema rješenja navedenih u Sec. 5.1.Algoritm pretrage za moguće gubitke po ciljanih uzoraka mikotoksina pripodgotovke dat je u Dodatku 1 ovog Metodicheskimukazaniyam.5.3. Priprema koncentracijom patronovPatrony Diapak su plastične kolonu koja sadrži 1 ili 3 kubnih metara. cm sorbenta.5.3.1 hermetički pakirani. A slaganje kertridža Diapak-3Vskryt linijski izlaz kertridža Diapak A-3, uklanjanje polimernuyuzaglushku. Set tonerom uspravno uske kontsomvniz odgovarajući uređaj za prikupljanje i evakuaciju elyuata.Ostorozhno otvorite poklopac polimernih tonerom da formiraju gornji sloj sorbenta rovnyygorizontalny tapkanja popatronu i popraviti koristeći mali pamuk tampona.Podklyuchit vakuum aparat za evakuaciju vakuum i kertridža obespechitpodachu .Kontsentriruyuschy kertridža Diapak A-3 za jednokratnu upotrebu iregeneratsii ne podlezhit.5.3.2. Koncentriranje tonerom Diapak AU-3Podgotovka koncentracijom tonerom Diapak AU-3 provoditsyaanalogichno n. 5.3.1.Kontsentriruyuschy tonerom Diapak AU-3 za jednokratnu upotrebu iregeneratsii ne podlezhit.5.3.3. Koncentriranje tonerom Diapak P-3Set tonerom Diapak P-3 u vertikalno podhodyascheeustroystvo za vakuum i otvorite gornji kryshku.Suspendirovat sorbenta uz mešanje sa staklenim štapićem u 10kub. Vidjeti benzen, ostavite stajati sorbenta i miss u slabomvakuume, izbjegavajući zarobljavanje zraka u sorbenta posledovatelnopo 10 cu. cm benzena i acetona atsetona.Sohraniv sloj od oko 2 cm, da se uvede porozne polimernyyfiltr (dostupno u paketu) i zapečatiti je štapić verhnemusloyusorbenta.Zatempropustit preostali aceton i sekvencijalno sa 10 cc. cm extractant i extractant -voda smjesa (1: 1), sprečavajući prodor zraka u sorbenta sa skorostyu2 - 3 kapi sekundu.Sohraniv sloj eluent trajati oko 2 cm, onemogućite vakuumu prigušiti prvi tonerom gornji kapak, a zatim (posleprekrascheniya kapanje) i kapicu na dnu. Tako je bolest pripremljen patrone može biti pohranjeni u toku radnog dana, i suši prisluchaynom je u radnom stanju prokachivaniem10 kocke. cm extractant smjesa - voda (1: 1) .Kontsentriruyuschy tonerom Diapak P-3 za višekratnu upotrebu ipodlezhit regeneraciju shema, kao što je gore opisano, nakon provedeniyaprobopodgotovki.5.3.4. Koncentriranje Diapak NSnyat glava sa glava Diapak H priključuje da prođe kroz njega uz pomoć 5 cc šprica. vidjeti benzena i zapečati na oba kraja tako patrona.Podgotovlenny patrone može biti pohranjena u techeniesutok na temperaturi ne višoj od 25 stepeni. C.Kontsentriruyuschy tonerom Diapak H višekratnu ipodlezhit regeneraciju sljedeće sheme nakon provedeniyaprobopodgotovki: - nakon pripreme uzorka DT - sekvencijalno preskočite cherezpatron 5 cu. cm etanola, acetona i nakon pripreme uzorka benzola-- AZ - sekvencijalno preskočite cherezpatron 5 cu. cm aceton i benzola.5.3.5. Koncentriranje Diapak SSnyat kasete kasetu C Diapak priključuje da prođe kroz njega uz pomoć 5 cc šprica. vidjeti benzena i zapečati na oba kraja tako patrona.Podgotovlenny patrone može biti pohranjena u techeniesutok na temperaturi ne višoj od 25 stepeni. C.Kontsentriruyuschy tonerom Diapak C jednokratnu iregeneratsii ne podlezhit.5.4. Izdvajanje mikotoksinov5.4.1. Zrna i zernoprodukty25 g baraka uzorak prebačen u konusnog bocu i zalit125 kocke. Vidjeti extractant. Obavljaju intenzivne peremeshivaniesoderzhimogo pljosku preko 30 min. Ekstrakt filter cherezbumazhny filter "blue ribbon".5.4.2. Orasi i uljarica kultur25 g baraka uzorak prenosi na Erlenmajer dobavit125 kocke. Vidjeti extractant i 40 kubnih metara. vidjeti heksana. Obavljaju intensivnoeperemeshivanie sadržaj boca za 30 minuta. Posleperemeshivaniya dodati da izvuče 1 g natrij klorida i prodolzhitperemeshivanie za 5 min. Filter kroz filter papir"blue ribbon". Filtrirani ekstrakt je prebačen u rješenje i nakon delitelnuyuvoronku paket prikupljaju -atsetonitrilny donji vodeni sloj. ekstrakt acetonitril odmašćivanje 25 cc heksana u razdvajanju lijevak s kapacitetom od 250 kubnih metara. sm.Ekstrakt prenesena na razdvajanje lijevak, dodajte 25 cc heptana i promiješati snažno. Nakon odvajanja sobratnizhny vode - acetonitril ekstrakt.5.4.3. Ulje rastitelnoe25 g ulja pretvoren u Erlenmajer, dodajte 40 cc. smgeksana i 125 kubnih metara. Vidjeti extractant. Obavljaju intensivnoeperemeshivanie sadržaj boca za 30 minuta. Posleperemeshivaniya da ekstrakt 0,2 g NaCl iprodolzhit miješajući za 3 - 5 min. Ekstrakt je prebačen vdelitelnuyu lijevak i nakon demixing prikuplja niži sloj vode i acetonitrila. ekstrakt acetonitril odmašćivanje 25kub. pogledajte heksana ili heptana ili petrolej, delitelnoyvoronke kapacitet od 250 cu. sm.Ekstrakt prenesena na razdvajanje lijevak, dodajte 25 cc heptana i promiješati snažno. Nakon odvajanja sobratnizhny vode - acetonitril ekstrakt.5.5. Pročišćavanje i koncentracija prob5.5.1. Pročišćavanje i koncentracija uzorka na opredeleniiaflatoksina B1 i zearalenona5.5.1.1. Preliminarni pročišćavanje i koncentracije proby25 kocke. cm obezmašćenih ekstrakt prošli kroz patronDiapak A-3 brzinom od 2 - 3 kapi u sekundi i 20 cc odaberite elyuata.Poluchenny eluata zapremine 20 kubnih metara. pogledajte razblažiti jednak obemomvody. Rezultirajući rješenje je prošla kroz tonerom Diapak soskorostyu P-3 1 - 2 kapi u sekundi, a zatim kasetu je ispran sa 5 cc vode i očišćena vazduha za 1 min.Tselevuyu fraktsiyuelyuirovatspatronaDiapakP 3posledovatelno 7-kocke. acetonitril i 7 cm kocke. 33 cm protsentnogobenzola acetonitril - brzinom od 1 - 2 kapi sekundu.Sobranny eluata je prošao kroz krevet bezvodnog natrij sulfata (10 g) gravitacija. Pljoska je ispran sa 2 cc. 33 cm protsentnogobenzola u acetonitril, a sadržaj prenose na isti sloybezvodnogo natrijum sulfat. Operite natrijev sulfat 3 cu. sm33 posto benzena u acetonitril. Osušen uparitdosuha filtrirati na rotacijskoj isparivaču na temperaturi ne više od 40 grad.C i odmah reosnovana 0,5 cc. Vidjeti benzola.5.5.1.2. Završno pročišćavanje na tonerom Diapak H (varijanta 1) benzen rješenje je primijenjen na kasetu predvaritelnokonditsionirovanny Diapak N. bocu koja sadrži suhoyostatok, oprati 2 puta sa 0,5 cu. vidjeti benzena i sekvencijalno primijeniti rješenja na klupko Diapak N. Svi pranja spatrona otbrosit.Zearalenon eluted iz patrone Diapak H 4 kocke. cm2 posto octene kiseline u benzena i ispari do suhoće (doischeznoveniya miris octene kiseline) u rotacijskoj temperatura isparitelepri ne više od 50 stupnjeva. C (Sample H). Dry ostatoknemedlenno reosnovana otapala sootvetstvuyuschemkonechnomu hromatografske opredeleniyu.Zatem eluiraju aflatoksina B1 5 cc. 20 cm protsentnogoatsetonitrila u benzena tonerom i ispari do isušivanja u azota potok pritemperature ne više od 40 stupnjeva. C (uzorka). Čvrste materije nemedlennopererastvoritvrastvoritele odgovarajući konechnomuhromatograficheskomu opredeleniyu.Ekvivalent težine uzorak koji je uzet za analizu aflatoksina B1, MNR, - 4 g.Ekvivalent težine uzorak koji je uzet za analizu zearalenon, MNR, - 4g.5.5.1.3. Završno pročišćavanje na tonerom Diapak C (varijanta 2) Pogodno za kukuruz i proizvode nee.Benzolny rješenja primijenjena na kasetu predvaritelnokonditsionirovanny Diapak S. bocu koja sadrži suhoyostatok, oprati 2 puta sa 0,5 cu. pogledajte benzena i nanestirastvory Diapak patrone C kada gornji nivo prethodnog rješenja filtrapatrona porcije. Svi pranja sa patronaotbrosit.Zearalenon Diapak eluted iz patrone sa 6 kubnih metara. sm10 posto etil acetata u benzena i ispari do suhoće (doischeznoveniya miris benzen) u rotirajućeg isparivača pritemperature ne više od 50 stupnjeva. C (Sample H). Čvrste materije nemedlennopererastvoritvrastvoritele odgovarajući konechnomuhromatograficheskomu opredeleniyu.Zatem Diapak kroz patrone C 3 cc dosljedno propustiti 5 posto octene kiseline u benzena i 4 cc. SM25 posto heksana u zraku. Svi eluata se odbacuju. AflatoksinV1 eluted iz patrone 6 cu. cm 10 posto aceton vdihlormetane. Je eluata je isparila do isušivanja pod azota potok na temperaturi od 40 stepeni nevyshe. C (uzorka). Čvrste materije odmah pererastvoritv otapalom kraj hromatograficheskomuopredeleniyu.Ekvivalent mase uzeti uzorak na analizu aflatoksina B1, MNR, - 4 g.Ekvivalent težine uzorak koji je uzet za analizu zearalenon, MNR, - 4g.5.5.2. Pročišćavanje i koncentracija uzorka na opredeleniidezoksinivalenola i T-2 toksina5.5.2.1. Preliminarni pročišćavanje i koncentracije proby20 kocke. vidjeti ekstrakt da prođe kroz tonerom Diapak AU-3 soskorostyu od 2 - 3 kapi u sekundi. Je eluata je prikupljen. Isperite kertridža 5kub. cm extractant i filter u kombinaciji eluata vserdtsevidnuyu bocu ispere 2 filter kocku. cm acetonitril sobirayapromyvochnuyu tečnosti u posudi. Rotatsionnomisparitele ispari do isušivanja na temperaturi od oko 60 - 70 stupnjeva. C. Uparivaniepovtorit od 2 - 3 puta uz dodatak na bocu 3 - 5 cc. smpropanola-2 ili acetonitril do nestanka kapljice vode Nastenko bocu (uzorak DT) .5.5.2.2. Završno čišćenje na kasetu Diapak NProbu DT otopljen u 0,5 cc. cm kloroform i primijenjene napredvaritelno uslovljeno tonerom Diapak N. obmytesche boca sa 2 puta 0,5 cu. cm nanestirastvory kloroform i sukcesivno na istoj glava, počevši prikupljanje frakcija koje sadrže T 2toksin u skidanje bocu. Kompletna eluiranjem T-2 toksina 2 KZ kloroforma u posudi. Je eluata je isparila u suhoće na rotatsionnomisparitele na 40 - 45 stepeni. C i rekonstituiranog vrastvoritele odgovarajući kraj hromatograficheskomuopredeleniyu T-2 toksin (Sample T) .Dezoksinivalenol eluted iz patrone na drugu dopunjavanja kolbu6 kocke. vidjeti 20 posto aceton u kloroform. Uparitdosuha eluata na rotacijskoj isparivaču na temperaturi od 40 - 45 stupnjeva. Ipererastvorit C u otapalo sootvetstvuyuschemkonechnomuhromatograficheskomu određivanje deoksinivalenol (Sample D) .Ekvivalent težine uzorak koji je uzet za analizu deoksinivalenol, MNR, - 4 g.Ekvivalent težine uzorak koji je uzet za analizu T-2 toksin, MNR, - 4g.6. Aflatoksin M16.1. Opreme, materijala, reagensi + -------------------------------------------- - + ----------------- + | IR rotirajućeg isparivača ili jedinice 1M2 | TU 25-1173.102-84 || ispari uzoraka u azota The grijanje | ili neki drugi . || SRI oko 40 stepeni. C | || TSLN Centrifuga tip-2 ili slično | W || 5-375-4171-73 aparat da se stvori vakuum od oko -0.7 mm | || Hg. (Voda-jet pumpa, ulje vakuum | || pumpa, medicinske usisavanje) | || vakuum uređaja za pripremu uzorka (Ba | || Kolektor-vakuum), sa prijemnicima vmesti- suđenje | || most nije manja od 10 kubnih metara. vidim | || Koncentriranje kertridža Diapak S16M, | TU 4215-002 - || kompanije "BioKhimMak CT"| 05451931-94 || Koncentriranje tonerom Diapak C, | TU 4215-002 - || kompanije "BioKhimMak CT"| 05451931-94 || Medical pinceta, 15 cm | || šprica kapaciteta 10 ili 20 kubnih metara. Pogledajte Luer | || ravnim dnom konusno boce sa čepovima, | || GOST 25336 s kapacitetom od 50 kubnih metara. vidim | || ostrodonnye boce s čepom, s izmjenjivim | GOST 25336 || direktnim konus 14/23 sa kapacitetom od 10 ili 25 kubnih metara. | || See | || kruške u obliku boce s čepom, s izmjenjivim | GOST 25336 || direktnim konus 14/23 s kapacitetom od 25 kubnih metara. vidim | || mjerenje cilindra s kapacitetom od 50 kubnih metara. Vidite, | GOST 1770 || 2 ćelije, ili epruveta diplomirao vmestimos-. | || Tew 15 ili 20 kubnih metara. vidim | || microsyringe s kapacitetom od 100 kubnih metara. mm ili pipet- | GOST 20292 || ka diplomirao izvršenje 4 ili 5, klasa 1 | || preciznost kapaciteta 1 cu. vidim | || nesterilisani medicinski pamuk, S / B | || Acetonitrile za tečne hromatografije, | W 6-09-14 - || OP-3, OFS, ispraviti ili | 2167-84 || Acetonitrile, 1 razred zadruga "Kriohrom", | || r. Sant - Petersburg | || Aceton, OFS, OP-2, ispravljena | || TU 6-09-3513-75 heptan, heksan, XV, ili je petrolej (mar- | TU 6-09-3375-78 || ki 70-100) , ispravljeno | || limunska kiselina, 1-vode, analitički razred | GOST 3652-29 || natrij klorida, reagens razred | || GOST 4233-66 kloroform medicinske, zadobio više CaCl | || 2 | || otkloniti | || Natrijev sulfat, bezvodni, reagens razred | GOST 4166-76 || destilirane vode | | + ---------------------------------------------- + - ---------------- + 20% acetona u kloroform - do 20 cu. aceton dobavithloroform cm do 100 cu. odnose na ukupan ili 5% metanola vhloroforme - do 20 cu. dodati 5 cm kloroform kocke. cm metanola kako bi volumen rješenje do 100 cc kloroform. sm.6.2. Način pripreme M1 probAflatoksin uklonjeni iz tečnog uzorka mlijeka kroz kasete propuskaniemee Diapak S16M. Frakcija koje sadrže aflatoksinM1, eluted sa kloroform i kasetu, nakon sušenja iuparivaniya, završno pročišćavanje se vrši na kasetu Diapak S.Podgotovlennaya uzorak spreman za hromatografske analizu.Aflatoksin M1 kreme i mlijeko pića ekstragiruyuthloroformom u prisustvu natrijevog klorida i limunska kiselina za konzistentnost sa MU N 4082-86 <*> и, после высушивания и упаривания,проводят окончательную очистку на патроне Диапак С.--------------------------------<*> Методические указания по обнаружению, идентификации иопределению содержания афлатоксинов в продовольственном сырье ипищевых продуктах с помощью высокоэффективной жидкостнойхроматографии. Утв. МЗ СССР 20.03.86 N 4082-86.Для проверки правильности проведения пробоподготовки иуточнения степени извлечения микотоксинов проводят анализ методомстандартной добавки в исходный экстракт.Время проведения пробоподготовки - 60 мин. Степень извлечения<*> - 80%. Относительное среднее квадратическое отклонение - 10%.--------------------------------<*> При снижении степени извлечения афлатоксина М1 см.Приложение 1.6.3. Подготовка концентрирующих патронов6.3.1. Концентрирующий патрон Диапак С16МСнять с патрона Диапак С16М заглушки и пропустить через него спомощью шприца последовательно по 5 куб. см ацетонитрила и воды.Заглушить оба конца патрона. Подготовленный таким образом патронможет храниться в течение суток при температуре не выше 25 град.C.Концентрирующий патрон Диапак С16М одноразового применения ирегенерации не подлежит.6.3.2. Концентрирующий патрон Диапак ССнять с патрона Диапак С заглушки и пропустить через него спомощью шприца 5 куб. см бензола и заглушить оба конца патрона.Подготовленный таким образом патрон может храниться в течениесуток при температуре не выше 25 град. C.Концентрирующий патрон Диапак С одноразового применения ирегенерации не подлежит.6.4. Подготовка проб молочных продуктов к анализу6.4.1. Подготовка, концентрирование и очисткапроб молокаПробу молока 50 куб. см центрифугировать на подходящемоборудовании в течение 5 мин. при 1000 об./мин. Для определенияафлатоксина М1 отобрать 20 куб. см супернатанта, избегая попаданияжира.Сухое молоко растворяется в соответствии с инструкцией илисоответствующим ТУ и обрабатывается, как описано выше.20 куб. см подогретой до 40 град. C подготовленной пробымолока пропустить через предварительно подготовленный патронДиапак С16М со скоростью 3 капли в секунду. Затем патрон промыть 5куб. см дистиллированной воды и высушить продуванием воздуха втечение 1 мин. Элюаты отбросить. Патрон промыть 10 куб. см гексанаи вновь высушить воздухом в течение 1 мин.Афлатоксин М1 элюировать 6 куб. см хлороформа. Собранный элюатпропустить самотеком через слой безводного сульфата натрия (3 куб.см). Колбу обмыть 1 куб. см хлороформа, и содержимое перенести натот же слой безводного сульфата натрия. Хлороформные растворысобрать (Экстракт М).6.4.2. Подготовка проб сметаны и кисломолочныхпродуктовВ коническую колбу вместимостью 250 куб. см помещают навеску20,0 г сметаны или 40 куб. см кисломолочного напитка. Затем тудаже вносят 10,0 куб. см водного раствора 2 г хлорида натрия и 0,24г лимонной кислоты и 100 куб. см хлороформа (все составные частипредварительно подогревают до температуры 35 - 38 град. C).Содержимое колбы встряхивают 2 - 3 мин., переносят в центрифужныестаканы и центрифугируют 15 мин. при 3000 - 4000 об./мин. Отделяютнижний хлороформный слой, высушивают над 10 г безводного сульфатанатрия, отфильтровывают, измеряют объем фильтрата (V ) и упариваютфдо 5 - 6 куб. см (Экстракт М).6.5. Окончательная очистка пробыЭкстракт М нанести на патрон Диапак С со скоростью 3 - 4 каплив секунду. Промыть сульфат натрия 1 куб. см хлороформа, и растворнанести на патрон Диапак С при достижении верхнего фильтра патронауровнем предыдущей порции раствора.Афлатоксин М1 элюировать с патрона 10 куб. см 20-процентногоацетона в хлороформе или 7 куб. см 5-процентного метанола вхлороформе. Элюат собрать и упарить досуха на ротационномиспарителе или в слабом токе азота при температуре не выше 40град. C. Сухой остаток немедленно перерастворить в растворителе,соответствующем конечному хроматографическому определению (ПробаМ).Эквивалент массы пробы молока, взятой на анализ афлатоксинаМ1, М , - 20 г.прЭквивалент массы пробы сухого молока рассчитывается поформуле:mМ = --- x 20, (6.1)прVгде:М - эквивалент массы пробы, взятой на анализ, г-прm - масса пробы сухого молока, г-V - объем воды для растворения пробы сухого молока, куб. см.Эквивалент массы пробы сметаны или кисломолочных напитков,взятой на анализ, рассчитывается по формуле:VфM = --- x m ,(6.2)пр 100пргде:M - эквивалент массы пробы, взятой на анализ, г-прV - объем фильтрата, куб. см-фm - масса (объем) пробы сметаны или кисломолочных напитков,прг (куб. см).7. Патулин7.1. Оборудование, материалы, реактивы+----------------------------------------------+-----------------+|Испаритель ротационный ИР-1М2 |ТУ 25-1173.102 - || |84 или др. ||Центрифуга типа ЦЛН-2 или аналогичная |ТУ 5-375-4171-73 ||Устройство для создания вакуума около -0,7 мм | ||рт.ст. (водоструйный насос, масляный вакуумный| ||насос, медицинский отсасыватель) | ||Вакуумное устройство для подготовки проб (ва- | ||куумный манифолд), с приемниками проб вмести- | ||мостью не менее 10 куб. см| ||Устройство для упаривания проб в токе азота | ||при нагревании около 40 град. C (желательно | ||суховоздушная баня) | ||Концентрирующий патрон Диапак П-3,|ТУ 4215-002 -||ЗАО "БиоХимМак СТ"|05451931-94 ||Концентрирующий патрон Диапак С, |ТУ 4215-002 -||ЗАО "БиоХимМак СТ"|05451931-94 ||Пинцет медицинский, 15 см | ||Колбы плоскодонные конические с пробками вмес-|ГОСТ 25336 ||тимостью 50 куб. см | ||Колбы остродонные с пробками с взаимозаменяе- |ГОСТ 25336 ||мым конусом 14/23 вместимостью 5, 10 или 25 | ||куб. см | ||Колбы грушевидные с пробками с взаимозаменяе- |ГОСТ 25336 ||мым конусом 14/23 вместимостью 25 куб. см | ||Пробирка градуированная вместимостью 15 или 20|ГОСТ 1770||куб. см | ||Цилиндры мерные вместимостью 10 и 50 куб. см, |ГОСТ 1770||2 кл. | ||Микрошприц вместимостью 100 куб. мм (или пи- |ГОСТ 20292 ||петка с делениями исполнения 4 или 5, 1-го| ||класса точности вместимостью 1 куб. см) | ||Бумажные фильтры обеззоленные марки ФОМ | ||Вата медицинская нестерилизованная, х/б | ||Ацетат цинка 2-водный, чда|ГОСТ 5823||Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, |ТУ 6-09-14 - ||ОП-3 осч, ректифицированный |2167-84 ||Ацетон, осч, ректифицированный, ОП-2 |ТУ 6-09-3513-75 ||Бензол, хч, ректифицированный |ГОСТ 5955-75 ||Гексацианоферат II калия (калий железистосине-|ГОСТ 4207||родистый) 3-водный, хч| ||Гептан, гексан, хч или петролейный эфир |ТУ 6-09-3375-78 ||(фракция 70-100), хч, ректифицированный | ||Хлороформ, медицинский, выдержанный над CaCl ,| ||2 | ||ректифицированный | ||Этилацетат (этиловый эфир уксусной кислоты), |ГОСТ 22300-76||хч, выдержанный над Na CO и ректифицированный| || 2 3| ||Карбонат натрия, хч |ГОСТ 83-79 ||Сульфат натрия, безводный, хч |ГОСТ 4166-76 ||Вода бидистиллированная | |+----------------------------------------------+-----------------+1,5% карбоната натрия - 1,5 г карбоната натрия растворить в100 куб. см воды.15% этилацетата в бензоле - 15 куб. см этилацетата разбавитьбензолом до 100 куб. см.30% этилацетата в бензоле - 30 куб. см этилацетата разбавитьбензолом до 100 куб. см.Раствор Карреза I - 15,0 г гексацианоферата II калиярастворить в 100 куб. см воды.Раствор Карреза II - 30,0 г ацетата цинка растворить в 100куб. см воды.7.2. Способ подготовки пробМикотоксин патулин извлекают из проб осветленных соков инапитков пропусканием их через патрон Диапак П-3. Затем патулинэлюируют этилацетатом с патрона и после обработки растворомNa CO , высушивания, упаривания и перерастворения проводят2 3окончательную очистку на патроне Диапак С.Соки и напитки с мякотью и консистентные продукты разводятводой, осветляют растворами Карреза в соответствии с ГОСТом28038-89 <*>, фильтруют и экстрагируют патулин пропусканиемфильтрата через патрон Диапак П-3. Затем патулин элюируютэтилацетатом с патрона и после обработки раствором Na CO ,2 3высушивания, упаривания и перерастворения проводят окончательнуюочистку на патроне Диапак С.--------------------------------<*> Продукты переработки плодов и овощей. Метод определениямикотоксина патулина. ГОСТ 28038-89.Подготовленные пробы готовы к хроматографическому анализу.Для проверки правильности проведения пробоподготовки иуточнения степени извлечения патулина проводят анализ методомстандартной добавки в пробу.Время проведения пробоподготовки - 90 мин. Степень извлечения<*> - 60%. Относительное среднее квадратическое отклонение - 10%.--------------------------------<*> При снижении степени извлечения патулина см. Приложение 1.7.3. Подготовка концентрирующих патронов7.3.1. Концентрирующий патрон Диапак П-3Установить патрон Диапак П-3 вертикально в подходящееустройство для вакуумирования и открыть верхнюю крышку.Суспендировать сорбент при перемешивании стеклянной палочкой в 10куб. см бензола, дать отстояться сорбенту и пропустить при слабомвакууме, не допуская попадания воздуха, последовательно по 10 куб.см бензола и ацетона.Сохранив слой ацетона около 2 см, ввести пористый полимерныйфильтр (имеется в комплекте) и уплотнить его палочкой по верхнемуслоюсорбента.Затемпропустить оставшийся ацетон ипоследовательно по 10 куб. см экстрагента (см. п. 5.1) и смесиэкстрагент - вода (1:1), не допуская попадания воздуха на сорбентсо скоростью 2 - 3 капли в секунду.Сохранив слой последнего элюента около 2 см, отключить вакууми заглушить патрон сначала верхней крышкой, а затем (послепрекращения скапывания) и нижней заглушкой. Подготовленный такимобразом патрон может храниться в течение рабочего дня, а прислучайном пересыхании приводится в рабочее состояние прокачиванием10 куб. см смеси экстрагент - вода (1:1).Перед проведением пробоподготовки через патрон Диапак П-3пропустить 10 куб. см воды.Концентрирующий патрон Диапак П-3 многоразового применения иподлежит регенерации после проведения пробоподготовки по схеме егоподготовки, как указано выше.7.3.2. Концентрирующий патрон Диапак ССнять с патрона Диапак С заглушки и пропустить через него спомощью шприца 5 куб. см бензола и заглушить оба конца патрона.Подготовленный таким образом патрон может храниться в течениесуток при температуре не выше 25 град. C.Концентрирующий патрон Диапак С одноразового применения ирегенерации не подлежит.7.4. Подготовка проб к анализу7.4.1. Подготовка осветленных соков и напитковОтфильтровать пробу через плотный бумажный фильтр до получения20 куб. см фильтрата (Фильтрат П).7.4.2. Подготовка соков и напитков с мякотьюи консистентных продуктовНавеску пробы массой 10,0 г поместить в стеклянный стакан,смешать с небольшим количеством дистиллированной воды иколичественно перенести в мерную колбу вместимостью 50 куб. см. Вмерную колбу внести 6,0 куб. см раствора Карреза I и 6,0 куб. смраствора Карреза II. Содержание колбы довести дистиллированнойводой до метки, тщательно перемешать и отфильтровать в мерныйцилиндр через бумажный складчатый фильтр. Измерить объем фильтрата(Фильтрат П).7.5. Концентрирование и очистка пробы7.5.1. Концентрирование пробы на патроне Диапак П-3Весь объемФильтратаПнанестина предварительнокондиционированный патрон Диапак П-3 со скоростью 1 - 2 капли всекунду. Промыть патрон 5 куб. см бидистиллированной воды. Всесмывы отбросить.Патулин элюировать с патрона 10 куб. см этилацетата в колбуили мерную пробирку с пришлифованной пробкой, содержащую 5 куб. см1,5-процентного карбоната натрия, закрыть пробкой, интенсивноперемешать и дать отстояться. Декантировать верхний этилацетатныйслой, высушить его безводным сульфатом натрия (3 г) и перенести вколбу для упаривания. В колбу или пробирку, содержащую оставшийся1,5-процентный карбонат натрия, добавить еще 10 куб. смэтилацетата, перемешать и, после полного расслоения, высушиванияэтилацетатного слоя тем же сульфатом натрия, объединить его спервой порцией этилацетатного раствора в той же колбе дляупаривания. Операцию повторить с 5 куб. см этилацетата.Упарить этилацетатный раствор на ротационном испарителе притемпературе не выше 40 град. C до объема около 0,5 куб. см (неупаривать досуха!). Количественно перенести пробу в сердцевиднуюколбу вместимостью не более 5 куб. см или в полимерную пробиркутипа Эппендорф, промыв предыдущую отгонную колбу 0,5 куб. смэтилацетата, и присоединить к упариваемой пробе. Пробу упарить втоке азота при температуре не более 40 град. C в суховоздушнойбане до 0,5 куб. см и добавить к ней 2,5 куб. см бензола.7.5.2. Окончательная очистка пробы на патроне Диапак СБензол - этилацетатный раствор пропустить через патрон ДиапакC со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Обмыть колбу еще 0,5 - 1,0куб. см 15-процентного этилацетата в бензоле и нанести на патрон.Все смывы отбросить.Патулин элюировать с патрона 6 куб. см 30-процентногоэтилацетата а бензоле, собирая элюат в сердцевидную отгоннуюколбу. Элюат упарить досуха в токе азота при температуре не выше40 град. C в суховоздушной бане.Внимание! После упаривания пробу немедленно перерастворить в100 мкл хлороформа, охлажденного до 0 - 5 град. C (для ТСХ -анализа) или в 100 - 500 мкл охлажденной до 5 - 8 град. Cбидистиллированной воды, подкисленной до pH 4,0 уксусной кислотой(для ВЭЖХ - анализа) и быстро охладить до 0 - 5 град. C (Проба П).Хранить Пробу П в холодильнике не более 1 ч.Эквивалент массы пробы осветленных соков и напитков, взятой наанализ, М , - 20 г, соков и напитков с мякотью и консистентныхпрпродуктов определяется по формуле:VФр.ПМ = ----- x m , (7.1)пр 50 пргде:М - эквивалент массы пробы, взятой на анализ, г-прV - объем Фракции П, куб. см-Фр.Пm - масса пробы соков и напитков с мякотью или консистентныхпрпродуктов, г.Приложение 1РЕКОМЕНДУЕМАЯ МЕТОДИКАИСПЫТАНИЙ КОНЦЕНТРИРУЮЩИХ ПАТРОНОВ ДИАПАКВведениеКаждая партия концентрирующих патронов Диапак П-3, ДиапакС16М, Диапак Н, Диапак С, а также партии сорбентов Диасорб А иДиасорб АУ подвергаются выходному контролю в соответствии сТУ 4215-002-05451931-94 наихсоответствиетребованиям,предъявляемым к специализированным патронам для твердофазнойэкстракции микотоксинов. Этим метрологически обеспечивается ихпроизводство.Применение настоящих испытаний рекомендуется проводить вследующих случаях:- еслирезультатпроверкиправильности проведенияпробоподготовки методом стандартной добавки не соответствуетнормативу коэффициента извлечения-- если патроны Диапак подвергались неправильному хранению илинарушена целостность упаковки-- в случаях дополнительного сверхнормативного использованиярегенерируемых патронов (Диапак Н, Диапак П-3).Приведенные ниже методики проверки патронов Диапак позволяютвыявить ошибку по стадиям пробоподготовки. При соответствиихарактеристик патронов Диапак нормативным требованиям следуетискать ошибки в правильности подготовки растворителей иприготовлениирастворов,контроле условий упаривания иперерастворения анализируемых проб.Если среди стадий подготовки пробы присутствует подготовка напатроне Диапак С, рекомендуется начинать анализ возможной потерицелевого компонента именно с этого патрона. Это связано счувствительностьюсиликагеляк качеству используемыхрастворителей, и прежде всего с содержанием в них воды. Такаяспецифика сильной зависимости активности патрона Диапак С отусловий его хранения и качества используемых растворителей можетпотребовать оптимизации количества элюента, используемого приработе с этими патронами в конкретной лаборатории.Общая частьНастоящая Методикапредназначенадляметрологическогообеспечения применения патронов Диапак в анализе микотоксинов иустанавливает процедуру их испытаний. Критерием качества патроновДиапак является соответствие результатов испытаний нормативамкоэффициента извлечения, K , в модельных экспериментах вRсоответствии со схемами элюирования, приведенными в разделах 5 - 7настоящих Методических указаний.Коэффициент извлечения рассчитывают по формуле:C` x KdK = ------- x 100, (1)R Cгргде:K - коэффициент извлечения данных микотоксинов, %-RC` - концентрация данного микотоксина, найденная в результатеиспытания, мкг/куб. см (или S` площадь хроматографического пика,соответствующая концентрации C`)-C - концентрация того же микотоксина, используемая длягрградуировки хроматографической системы, мкг/см (или Sплощадьгрхроматографического пика, соответствующая концентрации C )-грK - коэффициент разведения образца.dЗа окончательное значение K принимаетсясреднееRарифметическое результатов двух параллельных испытаний, еслиабсолютное расхождение между ними не превышает 5%.Испытания проводятся относительным методом по схеме "введено -найдено", поэтому специальных требований к стандартным образцаммикотоксинов не предъявляется.1. Испытание патронов Диапак А-3 иДиапак П-3 по афлатоксину В1 и зеараленонуИспытание патронов Диапак А-3 проводится совместно с ДиапакП-3 из-за низких концентраций афлатоксина В1 и зеараленона, атакже их температурной лабильности, приводящей к невозможностиконцентрирования упариванием. Патрон Диапак П-3 может быть испытаннезависимо от Диапак А-3, что рекомендуется выполнять потребителючерез каждые 10 проб после соответствующей регенерации по п.5.3.3.Приготовить из имеющихся стандартных растворов микотоксинов1,0 куб. см испытательной смеси, содержащей 0,4 мкг афлатоксина В1и 4,0 мкг зеараленона в произвольной смеси бензола и ацетонитрила.Аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см перенести в сердцевиднуюколбу, и упарить растворители досуха в токе азота при температуре40 град. C. Немедленно перерастворить остаток в 0,25 куб. смрастворителя, соответствующего конечному хроматографическомуопределению. Ориентировочные значения концентраций: 0,4 мкг/куб.см - для афлатоксина В1 и 4,0 мкг/куб. см - для зеараленона.Ввести раствор не менее двух раз в хроматографическую систему ирассчитать среднее арифметическое значение площадей пиков каждогоиз микотоксинов, C (S ).гр грПодготовить патроны Диапак А-3 и Диапак П-3 в соответствии сп. п. 5.3.1 и 5.3.3.Вторую аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см упарить аналогично,перерастворить в 25 мл экстрагента (смеси ацетонитрил - вода -84:16) и нанести на патрон Диапак А-3 в соответствии с п. 5.1.1.Полученные 20 мл элюата сконцентрировать на патроне Диапак П-3 всоответствии с п. 5.1.1. Концентратперерастворитьипроанализировать аналогично градуировочному эксперименту, получивзначение C`(S`).Рассчитать значение K по формуле (1). Значение K = 1,25.R dКоэффициент извлечения, K , должен быть не менее 90% - дляRафлатоксина В1 и 85% - для зеараленона.При испытании одного патрона Диапак П-3 вторую аликвотуобъемом 0,25 куб. см после упаривания перерастворить в 40 мл смесиэкстрагент - вода (1:1) (смеси ацетонитрил - вода 42:58) исконцентрировать в соответствии с п. 5.1.1. Рассчитать значениеK , принимая K = 1,00. Коэффициент извлечения, K , должен быть неRd Rменее 95% - для афлатоксина В1 и 95% - зеараленона.2. Испытание патронов Диапак АУ-3по дезоксиниваленолу и Т-2 токсинуПриготовить из имеющихся стандартных растворов микотоксинов1,0 см испытательной смеси, содержащей по 20 мкг дезоксиниваленолаи Т-2 токсина в произвольной смеси бензола и ацетонитрила.Аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см перенести в сердцевиднуюотгонную колбу и упарить досуха на ротационном испарителе притемпературе 40 - 50 град. C. Перерастворить остаток в 0,25 куб. смрастворителя, соответствующего конечному хроматографическомуопределению. Ориентировочное значение концентраций: 20 мкг/куб. см- для дезоксиниваленола и Т-2 токсина. Для градуировкихроматографической системы ввести раствор не менее двух раз ирассчитать среднее арифметическое значение площадей пиков каждогоиз микотоксинов, C (S ).гр грПодготовить патрон Диапак АУ-3 по п. 5.3.2.Вторую аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см упарить аналогично,перерастворить в 20 мл экстрагента (смеси ацетонитрил - вода84:16) и нанести на патрон Диапак АУ-3, в соответствии с п. 5.5.2.После упаривания досуха остаток перерастворить и проанализироватьаналогично градуировочному эксперименту, получив значение C` (S`).Рассчитать значение K по формуле 1. Значение K = 1,00.R dКоэффициент извлечения K должен быть не менее 95% - дляRдезоксиниваленола и Т-2 токсина.3. Испытания патрона Диапак НКонцентрирующие патроны Диапак Н являются универсальнымирегенерируемыми патронами для окончательной очистки афлатоксинаВ1), зеараленона, дезоксиниваленола и Т-2 токсина, поэтомуиспытание рекомендуется выполнять через каждые 10 проб послеочередной регенерации по п. 5.3.4. Патроны Диапак Н обеспечиваюттонкую очистку указанных микотоксинов с высокими метрологическимихарактеристиками (K не менее 90%), поэтому значения K менее 90%R Rчаще всего свидетельствуют об ошибках в приготовлении элюентов илио недостаточной чистоте растворителей.3.1. Испытание по афлатоксину В1 и зеараленонуСухой остаток упаренной второй аликвоты испытательной смеси поп. 1 немедленно перерастворить в 0,5 мл бензола и нанести поусловиям п. 5.1.2 на подготовленный (см. п. 5.3.4) патрон ДиапакН. После элюирования и упаривания Пробы З и Пробы А немедленноперерастворить их в 0,25 куб. см растворителя, соответствующегоконечному хроматографическому определению, и проанализироватьаналогично градуировочному эксперименту по п. 1, получив значениеC (S ) и C`(S`) по каждому из микотоксинов.гр грРассчитать значение K по формуле (1). Значение K = 1,00.R dКоэффициент извлечения K должен быть не менее 90% - дляRафлатоксина В1 и зеараленона.3.2. Испытания по дезоксиниваленолу и Т-2 токсинуСухой остаток упаренной второй аликвоты испытательной смеси поп. 2 перерастворить в 0,5 мл хлороформа и нанести по условиям п.5.1.2 на подготовленный патрон Диапак Н. После элюирования иупаривания Пробу Д и Пробу Т перерастворить в 0,25 куб. смрастворителя, соответствующего конечному хроматографическомуопределению, и проанализировать аналогично градуировочномуэксперименту по п. 2, получив значения C (S ) и C`(S`) погр гркаждому из микотоксинов.Рассчитать значения K по формуле (1). Значение K = 1,00.R dКоэффициент извлечения Kдолжен быть не менее 90% дляRдезоксиниваленола и Т-2 токсина.4. Испытания патрона Диапак СКонцентрирующие патроны Диапак С являются одноразовымипатронами для окончательной очистки афлатоксина В1 и зеараленона,а также афлатоксина М1 и патулина. Патроны Диапак С обеспечиваюттонкую очистку указанных микотоксинов с хорошими метрологическимихарактеристиками (K = 75 - 90%). Для достижения указанныхRхарактеристик необходимо установить оптимальный объем элюированиямоделированием порционного элюирования (1 - 3 порции по 3 мл)целевых фракций в ходе настоящих испытаний.Оптимальную схему элюирования, т.е. необходимое число порцийпо 3 мл, потребитель устанавливает по достижению суммарногокоэффициентаизвлечениянениже указанного норматива.Установленный объем элюирования подлежит проверке при смене партиирастворителей и их смесей, используемых для тонкой очисткимикотоксинов.4.1. Испытания по афлатоксину В1 и зеараленонуПодготовить патрон Диапак С в соответствии с п. 5.3.5.Сухой остаток упаренной второй аликвоты испытательной смеси поп. 1 немедленно перерастворить в 0,5 мл бензола и нанести напатрон Диапак С в соответствии с п. 5.1.3. После элюирования ираздельного упаривания трех фракций Пробы З и трех фракций Пробы Анемедленно перерастворить их в 0,25 куб. см растворителя,соответствующего конечному хроматографическому определению, ипроанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п. 1,получив по три значения Sи одному S` по каждому изгрмикотоксинов.Рассчитать K по формуле (1) для каждой из трех фракций Проб ЗRи А K = 1,00. Суммарный коэффициент извлечения K должен быть неdRменее 90% - для афлатоксина В1 и 85% - для зеараленона. Определитьминимальновозможноечисло последовательных фракций,обеспечивающее суммарный K не ниже норматива. Найденное числоRфракций (от 1 до 3) и определяет оптимальный объем элюированияданных микотоксинов с патрона Диапак С данной партии сприготовленными растворителями.Если значение суммарного K меньше нормативного значения, тоRэто свидетельствует об ошибках в приготовлении элюирующих смесейи/или о недостаточной чистоте растворителей, в особенности с точкизрения содержания в них воды.4.2. Испытание по афлатоксину М1Приготовить из имеющегося стандартного раствора 1,0 куб. смиспытательной смеси, содержащей 0,1 мкг афлатоксина М1 впроизвольной смеси бензола и ацетонитрила. Аликвоту смеси объемом0,25 куб. см перенести в сердцевидную колбу и упарить раствор втоке азота при температуре 40 град. C. Немедленно перерастворитьостаток в 0,25 - 1,0 куб. см растворителя, соответствующегоконечному хроматографическомуопределению.Ориентировочныезначения концентраций афлатоксина М1 0,025 - 0,1 мкг/куб. смсоответственно. Для проведения градуировочного эксперимента ввестираствор не менее двух раз в хроматографическую систему ирассчитать среднее арифметическое значение площадей пиковафлатоксина М1, C (S ).гр грВторую аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см упарить, какописано выше, перерастворить в 6 мл хлороформа и нанести вусловиях п. 6.5 на подготовленный (см. п. 6.3.2) патрон Диапак С.После элюирования и раздельного упаривания трех последовательныхфракций Пробы М немедленно перерастворить их в 0,25 - 1,0 куб. смрастворителя, соответствующего конечному хроматографическомуопределению, и проанализировать аналогично градуировочномуэксперименту, получив три значения C`(S`) по афлатоксину М1.Рассчитать K по формуле (1) для каждой их трех фракций ПробыRМ K = 1,00. Суммарный коэффициент извлечения K для афлатоксинаdRМ1 должен быть не менее 85%. Найти оптимальный объем элюированияафлатоксина М1 с патрона Диапак С по алгоритму, приведенному в п.4.1. Там же приведен алгоритм поиска ошибок.4.3. Испытание по патулинуПриготовить из имеющегося стандартного раствора 1,0 куб. смиспытательной смеси, содержащей 4,0 мкг патулина в произвольнойсмеси бензола и ацетонитрила. Аликвоту смеси объемом 0,25 куб. смперенести в сердцевидную колбу и упарить растворитель в токе азотапри температуре 35 - 40 град. C. Немедленно перерастворить остатокв 0,25 куб. см растворителя, соответствующего конечномухроматографическомуопределению.Ориентировочноезначениеконцентрации патулина: 4,0 мкг/куб. см. Для проведенияградуировочного эксперимента ввести раствор не менее двух раз вхроматографическую систему и рассчитать среднее арифметическоезначение площади пика патулина, C (S ).гр грВторую аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см упарить аналогично,перерастворить в 3 мл 15-процентного этилацетата в бензоле инанести в условиях п. 7.5.2 на подготовленный (см. п. 7.3.2)патрон Диапак С. После элюирования и раздельного упаривания трехпоследовательных фракций Пробы П немедленно перерастворить их в0,25 куб. смрастворителя,соответствующегоконечномухроматографическому определению, и проанализировать аналогичноградуировочному эксперименту по п. 4.3, получив три значенияC`(S`) по патулину.Рассчитать значение K по формуле (1) для каждой из трехRфракций Пробы П. K = 1,00. Суммарный коэффициент извлечения KdRдля патулина должен быть не менее 75%. Найти оптимальный объемэлюирования патулина с патрона Диапак С по алгоритму, приведенномув п. 4.1. Там же приведен алгоритм поиска ошибок.5. Испытание патрона Диапак П-3 по патулинуВторую аликвоту испытательной смеси по п. 4.3 объемом 0,25куб. см после упаривания перерастворить в охлажденной до 5 - 8град. C воде, подкисленной уксусной кислотой до pH 4,0, исконцентрировать в условиях п. 7.5.1 на подготовленном (см. п.7.3.1) патроне Диапак П-3. После элюирования и высушивания упаритьэтилацетатный экстракт досуха в токе азота при температуре 35 - 40град. C, немедленно перерастворить в 0,25 куб. см растворителя,соответствующего конечному хроматографическому определению, ипроанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п.4.3, получив значения C (S ) и C`(S`).гр грРассчитать значение K по формуле (1). Значение K = 1,00.R dКоэффициент извлечения K для патулина должен быть не менее 80%.R6. Испытание патрона Диапак С16М по афлатоксину М1Вторую аликвоту испытательной смеси по п. 4.2 объемом 0,25куб. см после упаривания перерастворить в 20 мл 5-процентногоацетонитрила в воде и нанести в соответствии с п. 6.4.1 наподготовленный по п. 6.3.1 патрон Диапак С16М. После элюирования ивысушивания упарить хлороформный экстракт М на ротационномиспарителе при температуре не выше 40 град. C, немедленноперерастворить его в 0,25 - 1,0 куб. см растворителя,соответствующего конечному хроматографическому определению, ипроанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п.4.2, получив значения C (S ) и C`(S`) для афлатоксина М1.гр грРассчитать K по формуле (1) K = 1,00. Коэффициент извлечения,R dK , по афлатоксину М1 должен быть не менее 95%.
zdravstvenog zakonodavstva

Moskva, Savezni centar za sanitarnu inspekciju Ministarstva zdravlja Rusije, 1999UtverzhdayuGlavny gosudarstvennyysanitarny vrachRossiyskoy FederatsiiG.G.ONISchENKO23 Oktobar 1999 godaData uvod u januaru 2000. godine goda4.1 -1. Metodi kontrole. HEMIJSKA FAKTORYOPREDELENIE MASS KONTSENTRATSIIMIKOTOKSINOV u hrani sirovina i PRODUKTAHPITANIYA. Priprema uzorka METODOMTVERDOFAZNOY EKSTRAKTSIIMETODICHESKIE UKAZANIYAMUK 4.1.787-991. Razvijen od strane Federalnog centra Državne sanitarne i epidemiološke MinzdravaRossii (VB Skachkov, IV Bragin, Queen NV) i CJSC"BioKhimMak CT" (Vodeći istraživač Vasiyarov GG, GS starshiynauchny zaposlenik Aleksejev, viši istraživač OsokinD.M., Doktor hemijskih nauka Staroverov SM.). 2. Odobreni i stupiti na snagu šef gosudarstvennymsanitarnym doktor Ruske Federacije od 23. oktobra 1999. godine D.3. Vpervye.1 predstavljen. Svrha i opseg primeneniyaNastoyaschie Metodicheskieukazaniyaustanavlivayutsposobypodgotovki uzoraka hrane sirovina i hrane produktovmetodom čvrstoj fazi ekstrakcije posleduyuschegohromatograficheskogo za mikotoksina analize i studije o sigurnosti su dlyaprovedeniyalaboratornyh pischevoyproduktsii gossanepidsluzhby institucijama Ruske Federacije, kao i dlyapredpriyaty i institucije koje se bave kontrolu kvaliteta iissledovaniya hrane sirovina i prehrambenih proizvoda za usklađenost sa Sanpin 2.3.2.560-96 "Kkachestvu higijenske potrebe i sigurnost hrane sirovina i pischevyhproduktov" i akreditovani u skladu sa utvrđenim poryadke.2. Način pripreme probPodgotovka uzoraka uključuje sljedeće sekcije: - vađenje test objekt pruža ekstrakt poluchenieedinogo sadrži sve mikotoksina normalizirana vdannom predmet Sanpin 2.3.2.560-96-- ekstrakta pripremu uzoraka po čvrstoj fazi ekstrakcije vklyuchayuschayapredvaritelnuyuochistku, kontsentrirovanieiokonchatelnuyu pročišćavanje na koncentracijom patrone Diapak.3 . Zahtjevi bezopasnostiPri reagensa, otapala i veschestvamineobhodimo u skladu sa sigurnosnim zahtjevima osnovana dlyaraboty toksične, korozivne i zapaljive supstance Pogost 12.1.005-88.4. Uvjeti pripreme probProtsessy obavljanja priprema i obrada uzoraka rješenje koje vnormalnyh uvjetima na temperaturi od 18 - 22grad. C.5. Aflatoksin B1 (AP-B1), zearalenon (ZON), deoksinivalenol (DON) i T-2 toksin (T-2) 5.1. Opreme, materijala, reaktivyTablitsa 1 + ------------------------------------ + ------ --- + --------- + --- + --- + | Opreme, materijala, reagensi | AT-B1 | ZON | DON | 2 || T i rješenja + ---- + ---- + ---- + ---- + | ||| 1 | 2 | 1 | 2 | | ||| var. | Gdje |. Var. | Var. | | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | tip shaker uzoraka | + || AVU-6C TU 64-1-2451-78 ili magnetnih | ||-magnetnoj ili mehanički mikserom | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | analitička vaga s preciznošću od | + || težio 0,01 g +/- | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | tip Mill "ciklon" QC-114 | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | rotirajućeg isparivača (TS-1M2, | + || W ili 25-1173.102-84 dr.) | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | uređaj za vakuum | + || o -0.7 mmHg (Waterjet | || pumpa, vakuum pumpu za ulje, | || Medicinski aspirator) | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | vakuum uređaja za trening | + || uzoraka (vakuum mnogostrukosti), sa prijemnicima | || nadimke suđenje kapaciteta ne manje od | || 10 cu. vidim | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | uređaj za isparavanje uzoraka | + | + | - | - | - | - || tok dušika podno grijanje oko ||||| | || 40 stepeni. C (suhi zrak je poželjno ||||| | || Bath) ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Koncentriranje kertridža Diapak A-3, | + | + | + | + | + | + || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | kompanija || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Koncentriranje tonerom Diapak AU-3, | - | - | - | - | + | + || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | kompanija || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Koncentriranje tonerom Diapak P-3, | + | + | + | + | - | - || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | kompanija || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Koncentriranje tonerom Diapak H, | + | - | + | - | + | + || TU 4215-002-05451931-94, ZAO ||||| | ||"BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Koncentriranje tonerom Diapak C, | - | + | - | + | - | - || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | kompanija || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | medicinske pinceta, 15 cm | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | metalne spatule ili porculana | + || žlicu | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | ravnim dnom boce sa konusnim | + | + | + | + | - | - || čepovi s kapacitetom od 50 kubnih metara. cm ||||| | || GOST 25336 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | ravnim dnom stožasti boce | + || (Erlenmeyer) zagušenja vmestimos- | || Tew 250 ili 300 ccm. cm | || GOST 25336 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | Buchner boca s kapacitetom od 500 kubnih metara. | + || See | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | lijevak Bunsen kapaciteta | + || 200 cu. vidim | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | lijevak razdvajanja kapaciteta | + || 250 cu. pogledajte GOST 25336 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | ostrodonnye boce sa čepovima na | + || GOST 25336 s izmjenjivim konu- | || som 14/23 kapaciteta od 5, 10 | || 25 cu. vidim | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | kruškolikog oblika boce sa čepovima na | + | + | + | + | - | - || GOST 25336 s izmjenjivim konu- ||||| | || som 14/23 kapacitet od 10 i 25 kubičnih metara. ||||| | || vidjeti ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | mjerenje cilindra sa kapacitetom od 25, 50, | + || 100 cu. cm 2 ćelije, prema GOST 1770 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | microsyringe s kapacitetom od 100 kubnih metara. mm | + || (ili pipete diplomirao GOST | || 20292 izvršenje 4 ili 5, 1. klasifikaciju. | || sa preciznost kapaciteta 1 cc) | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | filter papir (gusta, uska || - || - | + | + || koporistaya polako filtriranje ||||| | | | tanak tip sedimenta "plava ||||| | || Feed") ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | nesterilisani medicinske pamuk, | + || x / b | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | acetonitril za tečne hromatografije | + || Graphy, OP-3 OFS TU | || 6-09-14-2167-84, ispraviti | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | aceton, visoke čistoće, u skladu sa TU 6-09-3513-75 | - | + | - | - | - | - || OP-2, ispravljena ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Benzen, reagens razred, prema GOST 5955-75, vyder- | + | + | + | + | - | - || zhanny preko Na SO, ispraviti ||||| | || April 2 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | heptan, heksan, XQ, TU | + | + | + | + | - | - || 6-09-3375-78 ili petrolej, ||||| | || (frakcija 70 - 100), reagens razred, ||||| | Otkloniti || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 2-propanol (izopropil alkohol), | - | - | - | - | + | + || XQ, TU 6-09-402-75, ||||| | Otkloniti || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Octena kiselina glacijalnog, XV, u | + | + | + | + | - | - || GOST 61-75 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | kloroform, medicinske, zadobila | - | - | - | - | + | + || preko CaCl, ispraviti ||||| | || 2 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | metilen klorida (dihlormetan), | + | + | - | - | - | - || dużem CaCl, ||||| | || 2 ||||| | Otkloniti || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Eter dietil, zadobio više | - | + | - | - | - | - || NaOH, ispraviti ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | etil acetata (etil acetata || + || - || - || kiselina), reagens razred, u skladu sa GOST 22300-76, || ||| | || dużem Na CO i rektifitsi- ||||| | || 3. februar ||||| | Rowan || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | natrijev sulfat, bezvodni, reagens razred, od | + | + | + | + | - | - || GOST 4166-76 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | natrijev klorid, reagens razred, prema GOST 4233-77 | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | destilirane vode | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | extractant - 84% acetonitril u vo | + || de, 840 kubnih metara. Pogledajte acetonitril dovo- | || dyatsya na 1 litru vode ili polucha- | || etsya destilacijom vodom vodenim | || ali - acetonitril smjesa (1: 4) | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 33% benzena u acetonitril - mix | + | + | + | + | - | - || 30 cu. Vidjeti benzena i 60 kubnih metara. Pogledajte aceton ||||| | || tonitrila (1: 2) ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 20% acetonitril u benzena - 20 cu. | + | - | - | - | - | - || cm acetonitril razrijediti benzena ||||| | || do 100 kubnih metara. pogledajte ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 2% octene kiseline u benzenu - 2 | - | - | + | - | - | - || cu. pogledajte razblažiti octena kiselina ||||| | || benzena do 100 kubnih metara. pogledajte ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 5% octene kiseline u benzenu - 5 | - | + | - | - | - | - || cu. pogledajte razblažiti octena kiselina ||||| | || benzena do 100 kubnih metara. pogledajte ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 10% etil acetata u benzena - 10 cu. | - | + | - | + | - | - || cm acetat razblažiti benzena u ||||| | || 100 cu. pogledajte ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 25% heksana u vazduhu - 25 cu. vidim | - | + | - | - | - | - || heksan razrijeđen s dietil eter ||||| | || do 100 kubnih metara. pogledajte ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 10% acetona u dihlorometanu - 10 cu. | - | + | - | - | - | - || razrijediti aceton cm 
Udio u društvenim mrežama: 

 
Povezani
 
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.
Medicinski zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, akata.